求助：如何对混合NK/T细胞进行进一步分群

niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-6-20 16:41

                               
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老师，我看了下，我们用的就是BD FACS Calibur。。。

calibur一般能做4色。补偿什么的可以搜索本站相关资料进行学习。

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-20 16:02

                               
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这个我自己做的一个标本，CD3-FITC\CD56-PE/CD16-APC

具体的分群方法，还想请高手指点一下

1、R7下面那群不是CD3高表达的T吗？
2、这样划分可以啊。就是根据CD16的荧光强度并结合CD56的强度

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-6-20 21:33

                               
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1、R7下面那群不是CD3高表达的T吗？
2、这样划分可以啊。就是根据CD16的荧光强度并结合CD56的强度 ...

我是参考之前发的帖子里面的Beckman公司的分类方法，当时只留了一个链接
，但这张图片里面的T  CD3 Bright细胞看图示好像是在R7的右侧，我的标本里面没有看到，还是我的R7的划分方法有误？

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-21 03:22

                               
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我是参考之前发的帖子里面的Beckman公司的分类方法，当时只留了一个链接
，但这张图片里面的T  CD3 Brigh ...

幻灯里面说了，他们这个图里面的CD3brightCD56+的细胞可能是γδT，这类细胞主要参与粘膜免疫，所以在小肠、大肠等粘膜组织中可能会有10－30％左右的比例，而在PBMC中，约0.5－5％，所以你有时候看不到很正常的。

didi_zhou

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-21 03:22

                               
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我是参考之前发的帖子里面的Beckman公司的分类方法，当时只留了一个链接
，但这张图片里面的T  CD3 Bright ...

附件图片是当时用Gallios做10色Panel时候人血的结果，使用Kaluza分析的。
CD16-FITC/CD56-PE/CD3-APC-A700/CD45-KO (还有其他6色我就不写了)。溶血素与染料都是用的BC的试剂。
我觉得有可能是你的样品状态不好，或者溶血素太激烈。FS/SS分群不清，而且粒细胞明显分两群。建议先加入CD45试试。

didi_zhou

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-20 16:02

                               
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这个我自己做的一个标本，CD3-FITC\CD56-PE/CD16-APC

具体的分群方法，还想请高手指点一下

刚好里面还有个CD8-PB的，同一个结果里面的，一起帮你分析进去，我看看有没有专门做NK的结果帮你看看。

dragonhzqsmmu

didi_zhou 发表于 2013-6-24 20:56

                               
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附件图片是当时用Gallios做10色Panel时候人血的结果，使用Kaluza分析的。
CD16-FITC/CD56-PE/CD3-APC-A70 ...

厉害，学习了，我的标本是放4度冰箱过夜的全血，可能是不新鲜导致的，应该是新鲜分离后即刻染色分析或者染色后多聚甲醛固定后一个批次一起处理？

粒细胞分两群是否可以是红细胞的污染？因为我裂红后感觉离心下来的细胞还有不少红细胞，这种情况是再裂一次还是怎么处理？请教

dragonhzqsmmu

didi_zhou 发表于 2013-6-24 21:00

                               
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刚好里面还有个CD8-PB的，同一个结果里面的，一起帮你分析进去，我看看有没有专门做NK的结果帮你看看。
...

另外请教一下这个CD8/CD56的也是NK细胞？

niwanmao

didi_zhou 发表于 2013-6-24 20:56

                               
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附件图片是当时用Gallios做10色Panel时候人血的结果，使用Kaluza分析的。
CD16-FITC/CD56-PE/CD3-APC-A70 ...

很漂亮。@didi_zhou  能不能安排个时间，到http://meeting.flowcyto.cn 给我们做个8色或10色流式方面的讲座？

didi_zhou

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-24 21:22

                               
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另外请教一下这个CD8/CD56的也是NK细胞？

哈哈，我只是看到PPT上面有，然后我的结果里面也有就加进去了，具体什么意义我还没考虑过。你看看PPT吧。