流式细胞术如何正确进行设门？

初出茅庐

学习了，谢谢

hjj

请问倪老师，我用CD3/CD28刺激CD4+CD25-T细胞然后在IL-2存在的情况下培养5天，结果做流式如图一，没有刺激的图2。我不明白为什么刺激后细胞的SSC变大，这样我还能用于分析吗，谢谢倪老师

niwanmao

hjj 发表于 2020-3-21 17:11
请问倪老师，我用CD3/CD28刺激CD4+CD25-T细胞然后在IL-2存在的情况下培养5天，结果做流式如图一，没有刺激 ...

刺激之后细胞性状是会有所变化，不要紧，重要的是后面加上系列特异性标记，有利于更好的分析。

hjj

niwanmao 发表于 2020-3-21 18:26
刺激之后细胞性状是会有所变化，不要紧，重要的是后面加上系列特异性标记，有利于更好的分析。 ...

谢谢倪老师，那我可以把整个细胞群全部圈起来，然后分析，这样是对的吧

niwanmao

hjj 发表于 2020-3-21 20:51
谢谢倪老师，那我可以把整个细胞群全部圈起来，然后分析，这样是对的吧 ...

可以，通过FSC/SSC排除掉碎片，然后再用死活染料去掉死细胞，最后用系列特异性标记，圈出你需要分析的目标群体，再进行指标分析。