人treg细胞流式检测遇到问题

彩虹xy

倪老师，我的这个样本是确实是foxp3阳性率太高了？还是因为上机检测方法或数据处理的问题？我的这个数据结果正常吗？

彩虹xy

fernazy 发表于 2014-5-28 21:20
还有我建议你CD4单阳和CD25单阳管虽然不需要破膜固定，但是个人第一次调电压和补偿的时候也和染了FOXP3的样 ...

是因为破了膜会影响细胞位置吗？阴性管、CD4单阳管、CD25单阳管，也要进行破膜固定的步骤吗？谢谢啦.

niwanmao

彩虹xy 发表于 2014-5-28 22:38
倪老师，我的这个样本是确实是foxp3阳性率太高了？还是因为上机检测方法或数据处理的问题？我的这个数据结 ...

不高啊。根据PMG内部统计的结果，人Treg占CD4＋ T细胞的比例约4～9％，估计小鼠也差不多。
而根据你的数据，前面我帮你大致分析的结果是CD4＋CD25＋foxP3＋为1062个，CD4＋细胞大约在64000左右，除一下大概2％不到一点。

niwanmao

彩虹xy 发表于 2014-5-29 09:14
是因为破了膜会影响细胞位置吗？阴性管、CD4单阳管、CD25单阳管，也要进行破膜固定的步骤吗？谢谢啦. ...

我建议你这些管不用管它，你其实最主要是设置foxP3的分析位置，此时就需要用到FMO对照管（加CD4、CD25，就是不加foxP3），只要FMO管的处理、破膜、固定和实验管一模一样就行了。

彩虹xy

niwanmao 发表于 2014-5-29 19:15
不高啊。根据PMG内部统计的结果，人Treg占CD4＋ T细胞的比例约4～9％，估计小鼠也差不多。
而根据你的数 ...

谢谢倪老师，我还想请教一下，
试验中设置阴性管，CD4单阳管，CD25单阳管，foxp3单阳管，三染的样本管这样检测可以吗，需不需要做同型对照？
还有染了foxp3的单阳管和样本管细胞位置和阴性管，CD4，CD25单阳管的细胞位置发生了很大的改变，我需要对阴性管，CD4、CD25单阳管也做固定破膜处理吗？

彩虹xy

niwanmao 发表于 2014-5-29 19:17
我建议你这些管不用管它，你其实最主要是设置foxP3的分析位置，此时就需要用到FMO对照管（加CD4、CD25， ...

老师的意思是加一管染CD4和CD25，同时进行固定破膜吗？

niwanmao

彩虹xy 发表于 2014-5-29 19:25
谢谢倪老师，我还想请教一下，
试验中设置阴性管，CD4单阳管，CD25单阳管，foxp3单阳管，三染的样本管这 ...

调节电压和补偿，只需要全阴、CD4单阳，CD25单阳即可，foxP3的单阳你没法做出明显的阳性峰，所以做不做一个样。

同型对照没有必要做，因为你最后设foxP3，所以只要做一管含CD4、CD25的FMO对照即可。

niwanmao

彩虹xy 发表于 2014-5-29 19:30
老师的意思是加一管染CD4和CD25，同时进行固定破膜吗？

是的，含CD4、CD25的就是你这个实验的FMO，要跟FOXP3三染管一样的固定破膜。

彩虹xy

niwanmao 发表于 2014-5-29 20:16
是的，含CD4、CD25的就是你这个实验的FMO，要跟FOXP3三染管一样的固定破膜。 ...

谢谢倪老师，真的受益匪浅啊

彩虹xy

倪老师好，我按您的建议做了FMO管，增加了CD4CD25管，并且阴性管、CD4、CD25、FOXP3管都进行了破膜固定，请您帮我看一下结果怎么样，图形合理吗，并且，我要用FlowJo软件如何处理FMO管和样本管进行分析呢？
以下是我的数据，依次是阴性管、CD4管、CD25管、FOXP3管、FMO管（CD4CD25双标）、和六个样本管。