flowjo处理数据阴性样和阳性样设门后横坐标显示范围不一样

decade911

niwanmao 发表于 2015-3-16 10:28
可以用荧光标记植入前的细胞作为阴性对照，将那个对照保存于4℃，也可以上样后，用同样电压获取植入后的 ...

也就是说先分一部分细胞经甲醛固定后4摄氏度保存，剩余细胞经荧光标记后移植，一段时间后同时检测这些细胞，也就有阴性样了。
感觉这样应该可以了，谢谢倪老师。

niwanmao

decade911 发表于 2015-3-16 18:04
也就是说先分一部分细胞经甲醛固定后4摄氏度保存，剩余细胞经荧光标记后移植，一段时间后同时检测这些细 ...

如果时间短，不超过2天，是可以 这么做，但如果时间长的话，建议还是冻存到-80度再复苏。

decade911

niwanmao 发表于 2015-3-16 19:45
如果时间短，不超过2天，是可以 这么做，但如果时间长的话，建议还是冻存到-80度再复苏。 ...

     那就够呛了，我的最长时间是要3周后检测。还有这样的阴性细胞群和我最终检测的细胞群其实也不一样（最终的细胞群中包含宿主细胞），让移植未染色细胞的小鼠做阴性对照，虽然小鼠不一样，但细胞群组分是一样的，不知道这样退而求其次的设置符不符合规范，虽然我觉得背景荧光值稳定的在一个范围内。
     如果改用转基因小鼠中提出来的绿色荧光蛋白标记细胞来示踪，岂不是无法跑流式检测绿色荧光蛋白阳性？目前看到的文献上基本这种荧光示踪细胞做到切片观察就结束了，还没看到用这个做流式的，不知道是不是因为阴性样不好设置的缘故。
     这几天再查查文献，看看有没有检出含y染色体雄性细胞（非精子）的方法。

niwanmao

decade911 发表于 2015-3-17 10:34
那就够呛了，我的最长时间是要3周后检测。还有这样的阴性细胞群和我最终检测的细胞群其实也不一样（ ...

移植同种、未染色细胞小鼠做阴性对照肯定是最好的。

FCS

这个实验的阴性对照有参考文献吗？
强烈建议楼主分帖，后面的已经跟离题目很远了。

decade911

FCS 发表于 2015-3-17 15:21
这个实验的阴性对照有参考文献吗？
强烈建议楼主分帖，后面的已经跟离题目很远了。 ...

不好意思了。
今天看到以前下载的一篇利用荧光示踪的文献，发现其中有流式检测荧光标记细胞这一步，只是没详细介绍，我需要再好好看看。

decade911

niwanmao 发表于 2015-3-17 13:13
移植同种、未染色细胞小鼠做阴性对照肯定是最好的。

谢谢倪老师指点。原本担心用不是同一只小鼠上的细胞来设置阴性对照是不被认可的。今天看一文献也对荧光标记之后移植的细胞进行了流式检测，那他也会遇到我这个问题，如果荧光强度很强，阴性对照荧光峰会与阳性分得很清楚，也就很好检测了。

niwanmao

decade911 发表于 2015-3-17 18:54
谢谢倪老师指点。原本担心用不是同一只小鼠上的细胞来设置阴性对照是不被认可的。今天看一文献也对荧光标 ...

如果荧光强，并且不是全部都被转染上，那是肯定会有明显的阴性峰，不需要什么对照。就担心荧光弱，或者是出现全部都被转染上。