请教流式抗体滴定与染色异常问题

niwanmao

minazeng 发表于 2017-9-25 08:42
哦哦，原来如此，就是我现在已经做出来了，那请问老师表达效果好不好的具体标准有么？比如像您在前面提及 ...

如果不进行滴定的话，就单纯根据工作经验（根据样本中正常细胞的分群情况）判断。

家的感觉

niwanmao 发表于 2015-3-25 12:00
一开始做流式就做滴定，这是非常好的习惯，需要大力表扬。

1、计算信噪比，就是阳性峰的median除以阴性峰 ...

弱弱问一下倪老师，平时多色分析时加的死活染料比如7-AAD，是不是不用和其他染料调节补偿？因为分析时圈定的是7-AAD阴性群？

niwanmao

家的感觉 发表于 2017-9-25 15:52
弱弱问一下倪老师，平时多色分析时加的死活染料比如7-AAD，是不是不用和其他染料调节补偿？因为分析时圈 ...

也需要的。

分析要圈7-AAD阴性的活细胞。

家的感觉

niwanmao 发表于 2017-9-25 22:02
也需要的。

分析要圈7-AAD阴性的活细胞。

既然分析的时候是圈定7-AAD阴性，那么7-AAD对其他荧光的溢漏还有吗？
调补偿也和一般的多色一样调整是吗？调的时候是不是圈所有细胞看荧光溢漏？
如果用补偿微球调补偿，是不是7-AAD就不行了？谢谢！

niwanmao

家的感觉 发表于 2017-9-26 08:16
既然分析的时候是圈定7-AAD阴性，那么7-AAD对其他荧光的溢漏还有吗？
调补偿也和一般的多色一样调整是吗 ...

你的理解都是正确的。

1269189831

niwanmao 发表于 2017-9-25 08:39
可以先按照常规用量做一遍，对表达效果欠佳的，再进行滴定。这样节省滴定工作量。 ...

倪老师 对于细胞表达全阳的抗体如何滴定计算信噪比呀？染色样本mean值/未染色样本mean值？

niwanmao

1269189831 发表于 2018-6-7 11:39
倪老师 对于细胞表达全阳的抗体如何滴定计算信噪比呀？染色样本mean值/未染色样本mean值？ ...

不会有全阳的标记吧，即使是CD45，也有红细胞可做阴性参照

seall

倪老师， 滴定的时候需要用封闭抗体进行封闭吗，还有染死活细胞的燃料需不需要加，是不是应该跟正常染色条件一样，比如做表面抗原抗体的滴定，也要进行封闭和加死活细胞的燃料，只是抗体浓度不同，做几个系列稀释 来比较？

niwanmao

seall 发表于 2018-12-6 00:13
倪老师， 滴定的时候需要用封闭抗体进行封闭吗，还有染死活细胞的燃料需不需要加，是不是应该跟正常染色条 ...

如果有条件的话，当然一致是最好。
但是因为关键点是在确定最佳浓度，所以封闭、死活染料可以不用加，因为加不同浓度大家的条件是一致的。

熊峰

niwanmao 发表于 2015-3-25 12:00
一开始做流式就做滴定，这是非常好的习惯，需要大力表扬。

1、计算信噪比，就是阳性峰的median除以阴性峰 ...

倪老师，如果我实验时候是分析CD3+CD8+的细胞，在做CD8滴定的时候需不需要把CD3全都加上？为什么？