贴壁细胞PI（碘化丙啶）染色操作视频

niwanmao

sendohyozen 发表于 2015-9-3 09:32
老师您好!弱问一下,这实验我也马上要做了,以前做过峰形很难看,看视频PI这是不用洗直接上机吗?RNase也不用洗 ...

不洗的。

sendohyozen

niwanmao 发表于 2015-9-4 19:52
不洗的。

谢谢 老师的回答！

杨敏

老师，您好!第三个步骤，消化完毕，加入PBS洗下细胞。消化完后不用终止反应，直接加PBS吗

niwanmao

杨敏 发表于 2015-11-30 19:57
老师，您好!第三个步骤，消化完毕，加入PBS洗下细胞。消化完后不用终止反应，直接加PBS吗 ...

加入大量PBS洗涤不就等于中止吗？

杨敏

niwanmao 发表于 2015-11-30 19:59
加入大量PBS洗涤不就等于中止吗？

PBS能终止反应吗？还是只是把胰酶稀释？

niwanmao

杨敏 发表于 2015-11-30 20:55
PBS能终止反应吗？还是只是把胰酶稀释？

加入之后马上离心，胰酶的作用我觉得应该基本上发挥不了了吧。我是这么认为的。

杨敏

niwanmao 发表于 2015-11-30 19:59
加入大量PBS洗涤不就等于中止吗？

不好意思，倪老师。还有个问题，我只有7AAD，想用它做hela的周期。请问它的大致浓度是多少？7AAD能和RNA结合吗，或者说我需要加RNAse吗

niwanmao

杨敏 发表于 2015-11-30 21:03
不好意思，倪老师。还有个问题，我只有7AAD，想用它做hela的周期。请问它的大致浓度是多少？7AAD能和RNA ...

我看到的是25µg/ml 7AAD，跟rna会有交叉，仅供参考。

杨敏

niwanmao 发表于 2015-11-30 21:44
我看到的是25µg/ml 7AAD，跟rna会有交叉，仅供参考。

倪老师，我在wiki上查到的是7-Aminoactinomycin D (7-AAD) is a fluorescent chemical compound with a strong affinity for DNA. It is used as a fluorescent marker for DNA in fluorescence microscopy and flow cytometry. It intercalates in double-stranded DNA, with a high affinity for GC-rich regions,making it useful for chromosome banding studies。7aad是不是之作用于DNA啊？

cl小陈

老师您好，我看有的资料说，检测细胞周期时，1.需要同步化细胞，2.诱导细胞后处理时，细胞培养基和清洗的PBS都还要收集一并离心，；我想听听老师您的意见？