FMO对照和同型对照，你用对了吗？

niwanmao

hellohello 发表于 2020-4-14 19:46
老师您好，在这种情况下，由于实验条件限制没办法做生物学阴性对照实验，请问该如何画门？谢谢 ...

没有生物学阴性对照的情况确实不少，此时，就只能：
1、如果邻近通道有荧光渗漏，则Fc阻断后做FMO+同型对照，以此设门。
2、如果单色或无荧光渗漏，则做Fc阻断后，染同型对照。
只能如此。

hellohello

niwanmao 发表于 2020-4-14 20:58
没有生物学阴性对照的情况确实不少，此时，就只能：
1、如果邻近通道有荧光渗漏，则Fc阻断后做FMO+同型对 ...

老师，想问一下，你说的“Fc阻断后做FMO+同型对照”，是指做PE的FMO管的时候在此管里加上其他荧光的抗体和PE对应的同型抗体，然后再做一管同型对照，两管结合来看。还是说做PE的FMO管的时候在此管里加上其他荧光的抗体及同型抗体、PE对应的同型抗体，然后再做一管同型对照，两管结合来看。请问是哪一种制备方法？谢谢

niwanmao

hellohello 发表于 2020-4-15 09:57
老师，想问一下，你说的“Fc阻断后做FMO+同型对照”，是指做PE的FMO管的时候在此管里加上其他荧光的抗体 ...

例如A、B、C、D、E五个抗体的方案，要检测B的表达率 。

管1： Fc阻断后，加A、C、D、E+ B的同型对照
管2 ：Fc阻断后，加A、C、D、E、B
按照管1设门。

hellohello

niwanmao 发表于 2020-4-15 16:16
例如A、B、C、D、E五个抗体的方案，要检测B的表达率 。

管1： Fc阻断后，加A、C、D、E+ B的同型对照

明白了，谢谢老师～

小卡的口哨

倪老师：请问设了生物学对照还需要用FC block么，我是检测PBMC中的αβ T细胞，但PBMC里面还有单核等细胞，这些会不会导致假阳性呢？

zyn90813

niwanmao 发表于 2020-4-14 20:58
没有生物学阴性对照的情况确实不少，此时，就只能：
1、如果邻近通道有荧光渗漏，则Fc阻断后做FMO+同型对 ...

倪老师，您在之前的回复中提到Fc Blocking和同型对照不能一起做，但是您这里的回复写的是一起做，该怎么理解呢？

闷油瓶

niwanmao 发表于 2020-4-15 16:16
例如A、B、C、D、E五个抗体的方案，要检测B的表达率 。

管1： Fc阻断后，加A、C、D、E+ B的同型对照

用FMO对照的话，就不用调补偿了呗？

shiyisyl

hellohello 发表于 2020-4-14 19:46
老师您好，在这种情况下，由于实验条件限制没办法做生物学阴性对照实验，请问该如何画门？谢谢 ...

是不是加速FMO对照，就可以设门了，毕竟优先unstain，其次FMO

wmj123456

倪老师，如果是做的两色流式实验，在进行设门的时候，是否也可以用FMO作为设门对照？

tangxun

倪老师，同型对照信号会比真实偏高这个问题多年来一直遇到，您知道啥原因吗？