用Accuri C6检测转染细胞凋亡应该选择哪些荧光素？

470913706

sunzheng_99 发表于 2015-5-22 10:51
可以  但不是最大（好）激发

488确实可以激发7-AAD

470913706

sunzheng_99 发表于 2015-5-22 10:51
可以  但不是最大（好）激发

488确实可以激发7-AAD

470913706

niwanmao 发表于 2015-5-23 16:11
设门按照前者更好，选FSC/SSC排除碎片，然后圈EGFP阳性，最后分析AV/PI。

FSC-A/EGFP-A设门这种组合方式有什么优点呢？是排除哪些碎片或者粘连细胞的干扰吗

niwanmao

470913706 发表于 2015-5-23 19:34
FSC-A/EGFP-A设门这种组合方式有什么优点呢？是排除哪些碎片或者粘连细胞的干扰吗 ...

你不是想圈EGFP阳性的细胞吗？反正无论是用这种散点图还是直方图都可以。

470913706

niwanmao 发表于 2015-5-23 20:10
你不是想圈EGFP阳性的细胞吗？反正无论是用这种散点图还是直方图都可以。 ...

哦，好的，谢谢倪老师!

小憨

470913706 发表于 2015-5-22 22:45
FL1(EGFP)和FL3(7-AAD)，FL1(EGFP)和FL4(APC)也不需要调补偿，只需要调APC和7-AAD的补偿吧,这三种要方便 ...

你说的和我说的两种方案都需要做两个单阳，看起来都一样，也没有谁更方便。但是AV和PI或7AAD的单阳其实没那么好做，你要保证你的细胞有活的也得有死的，还要有凋亡的，即使你的细胞能弄出来，有时候分群也不是那么明显，所以我一般能不做这两个单阳就不做，尽量把这两个指标配开。以上是我个人理解，不是唯一搭配，供参考。

小憨

当然你也可以选用EGFP，PE标记的AV，7AAD这三种，然后做三个单阳，毕竟APC标记的AV比PE标记的贵不少。

lipanfirst

我做过类似的实验，建议用FSC/SSC射门去除碎片，然后圈EGFP阳性，最后分析AV/PI。

470913706

niwanmao 发表于 2015-5-23 16:11
设门按照前者更好，选FSC/SSC排除碎片，然后圈EGFP阳性，最后分析AV/PI。

倪老师，你倾向于用哪几种标记的荧光素？annexin V-APC/PI?

niwanmao

470913706 发表于 2015-5-25 11:49
倪老师，你倾向于用哪几种标记的荧光素？annexin V-APC/PI?

都行啊，能做出好结果的都是好染料。