请问用全血和PBMC标Treg在标Foxp3时步骤有什么区别吗？

逗比猫

想问一下一般小鼠，也是向做PBMC标TREG，取血多少比较合适？

niwanmao

逗比猫 发表于 2018-12-7 15:13
想问一下一般小鼠，也是向做PBMC标TREG，取血多少比较合适？

小鼠取不了多少，不建议提取PBMC，效果会很差，而是建议用全血直接染

holmes27

niwanmao 发表于 2017-7-21 22:35
1、直接做破膜管。
2、如果你的foxP3分群不清，需考虑破膜剂或foxP3质量

倪老师您好！请问您说的“直接做破膜管”，是指的标记Treg细胞时可以直接破膜后再染所有的抗体吗（膜内外的都有）？

niwanmao

holmes27 发表于 2019-2-20 20:39
倪老师您好！请问您说的“直接做破膜管”，是指的标记Treg细胞时可以直接破膜后再染所有的抗体吗（膜内外 ...

我说的意思是让那位站友直接做破膜那一管，不需要设置空白对照之类的，因为FoxP3等标记分群都非常好的。

你说的这个事情也是可以的，但是需要确定要染的这些表面抗体不会受到固定之后的影响，因为有些抗原被固定之后可能就结合不上去了。

小鹿

niwanmao 发表于 2017-7-19 22:17
一般不建议分离PBMC，对于这些稀有亚群，容易造成细胞丢失。这个帖子是当年回答一位站友时写的。 ...

老师，那刚取出的抗凝全血测：胞内因子的例如TH1/TH2/TH17需要刺激剂刺激的细胞群，需要先用红细胞裂解液裂解然后收集细胞--然后加刺激剂--加表面抗体--固定破膜加胞内抗体吗？还是说可以抗凝全血先加刺激剂刺激，然后裂红标记相应抗体。

抑或是用别的方法提取PBMC/淋巴细胞之后刺激孵育相应抗体再检测。

范晋波

小鹿 发表于 2020-5-6 16:21
老师，那刚取出的抗凝全血测：胞内因子的例如TH1/TH2/TH17需要刺激剂刺激的细胞群，需要先用红细胞裂解液 ...

全血刺激，刺激完用eb的破膜剂，他们的固定剂可以直接将红细胞裂解掉，而且破膜的效果很好

niwanmao

小鹿 发表于 2020-5-6 16:21
老师，那刚取出的抗凝全血测：胞内因子的例如TH1/TH2/TH17需要刺激剂刺激的细胞群，需要先用红细胞裂解液 ...

目前商品化的破膜剂，基本上组份1固定，组分2破膜+裂红，所以不需要特地用红细胞裂解液的。

小鹿

范晋波 发表于 2020-5-6 17:01
全血刺激，刺激完用eb的破膜剂，他们的固定剂可以直接将红细胞裂解掉，而且破膜的效果很好 ...

好的，感谢。还想请教一下测以上三种细胞有用过什么公司的刺激剂效果比较好的吗？。

小鹿

niwanmao 发表于 2020-5-7 09:03
目前商品化的破膜剂，基本上组份1固定，组分2破膜+裂红，所以不需要特地用红细胞裂解液的。 ...

那老师测这些胞内因子的不用特定破膜的试剂盒，如果只用4%多聚甲醛固定，皂素破膜可不可取呢？如果要测TH1TH2TH17的话，可以同时刺激，孵育CD4后、同时破膜孵育抗体IFN-Γ，IL-4、IL17吗？对这个不太了解，问题比较多。

niwanmao

小鹿 发表于 2020-5-7 10:05
那老师测这些胞内因子的不用特定破膜的试剂盒，如果只用4%多聚甲醛固定，皂素破膜可不可取呢？如果要测TH ...

这样做是可以做，但是皂素的浓度比较难摸索，而且需要额外裂红。