楼主: niwanmao
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同型对照荧光比抗体强,咋办?阻断!

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发表于 2019-1-18 11:03:01 | 显示全部楼层
老师你讲的好好!我实验就是又用阻断剂又做同型对照,之前一直不明白,看了你的文章恍然大悟。因为我的细胞是单核白血病细胞,染色抗体又用的IgG1。谢谢老师~
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发表于 2019-3-26 14:37:33 | 显示全部楼层
所以还是在多色T淋巴时,注意补偿和FMO即可。省钱啦~
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发表于 2019-8-13 17:35:13 | 显示全部楼层
倪老师,请问封闭结束后是否需要洗,还是可以直接标目的抗体?
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 楼主| 发表于 2019-8-13 22:22:33 | 显示全部楼层
moreorless 发表于 2019-8-13 17:35
倪老师,请问封闭结束后是否需要洗,还是可以直接标目的抗体?

不需要洗,直接染。
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发表于 2019-11-1 15:53:59 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-12-19 08:15
可以。效果肯定是Fc Block好。

倪老师,那如果要检测单核细胞或者巨噬细胞的话,那是否就不能使用Fcblocking了?检测这些细胞就尽可能选用一些IgG2b亚型的抗体?
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 楼主| 发表于 2019-11-1 21:23:26 | 显示全部楼层
2627443 发表于 2019-11-1 15:53
倪老师,那如果要检测单核细胞或者巨噬细胞的话,那是否就不能使用Fcblocking了?检测这些细胞就尽可能选 ...

也可以用,阻断的点不是检测抗体结合位点。
但是,对于分群清楚的抗原,我觉得没必要阻断,因为分群足够设门了。
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发表于 2019-11-2 10:55:35 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-11-1 21:23
也可以用,阻断的点不是检测抗体结合位点。
但是,对于分群清楚的抗原,我觉得没必要阻断,因为分群足够 ...

好的,明白了,谢谢倪老师~
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发表于 2020-1-6 11:12:00 | 显示全部楼层
老师您好!我做人单核细胞白血病细胞系U937的分化,用的是Biolegend的IgG1的CD11b抗体(CD11b确实没有IgG2b的),之前确实有发现标了iso比空白管APC荧光更强的现象,所以根据您这边的建议买了BD的Fc block。按说明书1X10^6细胞先加了2.5μg的Fc block室温封闭10min后再分别标5μL的CD11b IgG1 iso和CD11b的抗体,半小时后洗2次上机(BD LSR)。由于相对比Fc block的效果,因此做了不加block只加抗体的对照。结果非常奇怪:空白管、iso和iso+block管的CD11b水平基本无差别,但CD11b+block比单标CD11b的细胞分化更多!不知道如何解释了……
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 楼主| 发表于 2020-1-6 15:48:11 | 显示全部楼层
西府海棠121 发表于 2020-1-6 11:12
老师您好!我做人单核细胞白血病细胞系U937的分化,用的是Biolegend的IgG1的CD11b抗体(CD11b确实没有IgG2b ...

分群效果如何?最好把图放上来吧。
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发表于 2020-4-15 00:02:24 | 显示全部楼层
老师,文章链接出现错误,打不开啊
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