流式直方图不是正态的怎么调整

niwanmao

小兔子乖乖 发表于 2016-12-28 21:04
倪老师，详见上个回复呦~(∩_∩)

看明白了，是电压太低的缘故。你上面几个图中，APC和PE-cy7均采用了Logicle坐标，将压轴的信号显示出来，但由于原来的电压太低，所以导致很多信号还是靠近坐标轴附近压成一条。

建议：获取时，APC和PE-cy7的电压调高。

小兔子乖乖

niwanmao 发表于 2016-12-28 22:05
看明白了，是电压太低的缘故。你上面几个图中，APC和PE-cy7均采用了Logicle坐标，将压轴的信号显示出来， ...

倪老师，我把APC和PE-CY7散点图的X和Y轴都调成双参数的了，但是还是压在0的位置，并没有像FITC那样在负数区出现细胞，这个是怎么回事呢？另外，我上机的时候调电压时是依据师姐流传的“阴性群体在10的2-3次方内，阳性群体在10的3-4次方范围”调的电压，基本上所有通道都是这个原则，为什么FITC的没事，APC和PE-CY7的就不行呢？对于调电压这件事，倪老师有什么更好的建议么~求解(∩_∩)

niwanmao

小兔子乖乖 发表于 2016-12-28 23:22
倪老师，我把APC和PE-CY7散点图的X和Y轴都调成双参数的了，但是还是压在0的位置，并没有像FITC那样在负数 ...

我有点不太相信你是按照“阴性群体在10的2-3次方内，阳性群体在10的3-4次方范围”来调节的，尽管这个原则说的不对，但如果你真是按照这个原则来调节的，不可能会压线压成这样。

我的建议就是你上这个样本时，调高电压试试。

小兔子乖乖

niwanmao 发表于 2016-12-29 08:17
我有点不太相信你是按照“阴性群体在10的2-3次方内，阳性群体在10的3-4次方范围”来调节的，尽管这个原则 ...

倪老师，我今天又去流式机子里看了下原始图，发现确实如您所说，阴性群不在10的2-3次方之间，但是阳性群确实在10的3-4次方之间，这样的话还需要再调高电压么？调高以后阳性群有部分堆到右侧呈直线状了不知道怎么解决呀~现将机子里的图片导出来了，并做了整理，图A是4个荧光通道的单阳管（散点图及柱状图都有），图B是样本管里的情况~劳烦您给分析分析(∩_∩)

niwanmao

小兔子乖乖 发表于 2016-12-29 22:08
倪老师，我今天又去流式机子里看了下原始图，发现确实如您所说，阴性群不在10的2-3次方之间，但是阳性群 ...

这样的分布基本上正常啊。但是你前面叠加的直方图里面那两个就左侧明显没出来。

小兔子乖乖

niwanmao 发表于 2016-12-29 22:10
这样的分布基本上正常啊。但是你前面叠加的直方图里面那两个就左侧明显没出来。 ...

倪老师，您说为啥我的图不是正态分布的呢~别人文献里的图都可好看了~我这个是啥个情况呀~做柱状图的时候是用双参数转换还是用log的呢？叠加的那个我使用flowjo做的，不知道为啥这样呀~求解

niwanmao

小兔子乖乖 发表于 2016-12-29 23:21
倪老师，您说为啥我的图不是正态分布的呢~别人文献里的图都可好看了~我这个是啥个情况呀~做柱状图的时 ...

不是啊，你叠加的数据和这里的数据肯定不一样啊，完全不是同样的分布。
你这里的数据没问题啊，稍微偏右歪一点完全正常的，说明阳性峰为主，部分细胞荧光偏弱，别人正态分布那是别人的数据，只要你的结果说明结论，数据没有问题就OK啊，谁能质疑结果真实性。