转染后细胞带GFP荧光，想做凋亡选了APC-PI可是还是有问题.....

huanranyixin

niwanmao 发表于 2017-4-12 19:28
正常的Annexin V APC肯定会有荧光的，所以你这里没有荧光，是不是有可能通道选择有问题？你们实验室有没 ...

没有荧光？？？新仪器……那是不是染料有问题？？哪里的问题……

niwanmao

huanranyixin 发表于 2017-4-24 16:52
没有荧光？？？新仪器……那是不是染料有问题？？哪里的问题……

GFP和PI之间的散点图放出来看看。
也不一定是染料问题，只是Annexin V APC的单染管没有明显的阳性群，所以感觉不是很好。

huanranyixin

niwanmao 发表于 2017-4-24 22:12
GFP和PI之间的散点图放出来看看。
也不一定是染料问题，只是Annexin V APC的单染管没有明显的阳性群，所 ...

老师，GFP和PI之间的散点图是什么意思？我一直也不知道为什么没有阳性群……

lingxue

1、染料选择是可以的。我们实验室做GFP转染的细胞都是用这两个染料。2、可以荧光显微镜镜下看细胞与染料结合情况（PI结合在细胞核，annexin V APC 应该是在膜上。）3、如果是贴壁细胞，注意消化时间和洗涤吹打过程对细胞的损伤。孵育时间可以稍微延长，我一般室温避光孵育30min。还有一点，如果是用PBS去洗细胞的话，加抗体前一定要把PBS吸干净。4、见图，做的也不是很好，分群还是明显的。