foxp3破膜时间

niwanmao · 发表于 2010-8-1 21:15:23

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标题：foxp3破膜时间

我现在正在做foxp3破膜后的流式检测，用的都是ebioscience公司的破膜剂和抗体，破膜时间我刚开始用了50分钟（4度避光），流式检测发现都是细胞碎片，后来减短为30分钟，三管中除了一管没有细胞碎片外其余两管仍有很多碎片，很纳闷，如果再缩短破膜时间的话，我担心foxp3抗体又进不了胞内，请各位老师指教!

回复ni老师：

我所用的细胞是从外周血分离获得的淋巴细胞并加用各种细胞因子培养了十天，显微镜下细胞状态还是不错的，破膜剂是半年前从联科公司购买的。图片如下：

回答者：niwanmao

按照ebioscience的protocol，的确是需要30－60分钟破膜。如果出现你所说的情况，需要考虑以下几种可能：

1、标本问题。标本是否新鲜？

2、试剂问题。破膜剂有没有问题？

3、获取。由于使用破膜剂后，细胞大小等性质会发生改变，有没有可能跟你所谓的碎片混在一起了？最好放几张图上来看看。

2009年8月12日 0:54

James006 · 发表于 2013-1-5 23:21:16

学习一下

liaoyanchun · 发表于 2013-7-4 18:16:59

如果同时标il-17和foxp需要用2种破膜剂吗?------破胞膜的和破核膜的

niwanmao · 发表于 2013-7-4 19:46:30

liaoyanchun 发表于 2013-7-4 18:16

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如果同时标il-17和foxp需要用2种破膜剂吗?------破胞膜的和破核膜的

用foxP3的破膜剂即可。

liaoyanchun · 发表于 2013-7-4 20:09:44

niwanmao 发表于 2013-7-4 19:46

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用foxP3的破膜剂即可。

了解,谢谢

liaoyanchun · 发表于 2013-7-7 00:49:50

本帖最后由 liaoyanchun 于 2013-7-7 00:52 编辑

niwanmao 发表于 2013-7-4 19:46

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用foxP3的破膜剂即可。

老师,急切求助!:下面这幅是用标胞浆内细胞因子的固定,破膜剂",第二幅图用的是标FOXP3的专用破膜剂(新买的),为什么形态差别这么大,这两组的细胞是一模一样的,处理也一样,唯一不一样的就是固定,破膜剂.........

liaoyanchun · 发表于 2013-7-7 00:51:23

niwanmao 发表于 2013-7-4 19:46

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用foxP3的破膜剂即可。

传漏了一张,这张是标包浆内抗体的固定剂和破膜剂

niwanmao · 发表于 2013-7-7 11:23:37

liaoyanchun 发表于 2013-7-7 00:51

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传漏了一张,这张是标包浆内抗体的固定剂和破膜剂

两者成份不同，所以结果肯定不同，这是正常的。相对来说，我认为foxP3那个分群更好。

这里顺便提一句，foxP3的破膜剂和普通破膜剂的步骤略有不同，你不能一样化处理的，得老老实实按照相应的步骤做。

liaoyanchun · 发表于 2013-7-7 15:00:20

niwanmao 发表于 2013-7-7 11:23

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两者成份不同，所以结果肯定不同，这是正常的。相对来说，我认为foxP3那个分群更好。

这里顺便提一句，f ...

好的,谢谢老师

459997031 · 发表于 2014-4-22 01:15:48

niwanmao 发表于 2013-7-7 11:23
两者成份不同，所以结果肯定不同，这是正常的。相对来说，我认为foxP3那个分群更好。

这里顺便提一句，f ...

倪老师,我当初买的破膜剂不是特殊针对FOXP3的,是catlog FIX&PERM(老板说他在国外就用的这个,对细胞影响较小),对我的FOXP3标记有影响吗?

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