请帮忙分析一下这两个通道能否同时染呢？

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-9-13 08:01
首先，我觉得这类荧光素存在的可能性小，其次即使能被两个波长的激光同时激发，也有主次之分。 ...

那有不有两个荧光素之间，补偿太大，基本上发射光谱都是一样的，无法调补偿的情况。请举例说说，我下次好注意一下呢

lgfffancy

ghqiu09 发表于 2017-9-12 08:58
可以吧，之前记得不同激发光的光路是不在一条路上的，但是不理解为什么又需要补偿。不能同时染的染料多了， ...

举点例子吧

ghqiu09

lgfffancy 发表于 2017-9-14 22:44
那有不有两个荧光素之间，补偿太大，基本上发射光谱都是一样的，无法调补偿的情况。请举例说说，我下次好 ...

“补偿太大，无法调补偿”的话就不能同时染了，补偿大如果可以避免同时染的染料比如说PI和PerCP通道，都被488激发，但是PI的波普太宽了，两个的补偿有点大，不过也还可以同时染，再比如PEcy7和PE也是一样的情况。看两个荧光素能不能同时染，可以参考这个http://www.bdbiosciences.com/cn/s/spectrumviewer

lgfffancy

我想成大牛 发表于 2017-9-14 15:48
不同的激发光对应有不同的检测通路，你可以理解为不同激发光激发出来的荧光走不同的路，即使路上收费站（滤 ...

我想问一下红色荧光选哪个通道啊，我知道绿色荧光选FITC通道。那红色呢

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-9-14 22:44
那有不有两个荧光素之间，补偿太大，基本上发射光谱都是一样的，无法调补偿的情况。请举例说说，我下次好 ...

如果两个荧光素，激发光和发射光谱都相似，那就在同一个通道检测了。
很多啊，例如FITC和Alexa Fluor 488、APC和Alexa Fluor 647等等。

我想成大牛

lgfffancy 发表于 2017-9-17 15:39
我想问一下红色荧光选哪个通道啊，我知道绿色荧光选FITC通道。那红色呢

你理解错了。是FITC在488nm绿色激光激发的检测通道，倒过来说就错了。也没有哪一个抗体是专门的绿色荧光，发出绿色或红色的荧光的染料有很多，至于是哪个通道，你要看它的激发光是哪种，确定了激发光就确定了检测通路。

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-9-17 19:52
如果两个荧光素，激发光和发射光谱都相似，那就在同一个通道检测了。
很多啊，例如FITC和Alexa Fluor 488 ...

那就是FITC和Alexa Fluor488是不能同时染的，对吧，因为他们用都是488nm激发，然后检测通道也一样。

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-9-17 19:52
如果两个荧光素，激发光和发射光谱都相似，那就在同一个通道检测了。
很多啊，例如FITC和Alexa Fluor 488 ...

那就是FITC和Alexa Fluor488是不能同时染的，对吧，因为他们用都是488nm激发，然后检测通道也一样。

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-9-20 20:58
那就是FITC和Alexa Fluor488是不能同时染的，对吧，因为他们用都是488nm激发，然后检测通道也一样。 ...

是的。

slqian

不知道PE-CY5能被640直接激发CY5吗？如果能直接激发，那么640就直接激发CY5和APC，由于这两个染料发射波长基本相同，所以基本无法分开。