为什么我的样品组只看到凋亡细胞，没有活细胞？？？

niwanmao

Helen_ztt 发表于 2017-10-21 18:10
我错了，倪老师，你回答我那篇帖子的时候，我们已经试多聚甲醛了……我们一定改回正规的阳性对照！
不过 ...

样本组本身就存在一定的非特异性荧光，出现漂移才是正常的，尤其是组织细胞，经过处理后，更容易出现非特异性结合。而且，之前站内很多帖子都反复强调过，空白对照只是用于大致了解电压设置范围，不能用来设门，不能用来设门，不能用来设门。

Helen_ztt

niwanmao 发表于 2017-10-22 14:16
样本组本身就存在一定的非特异性荧光，出现漂移才是正常的，尤其是组织细胞，经过处理后，更容易出现非特 ...

哦哦，我明白了！不过，荧光值达到多少才算阳性，而不是非特异呢？还有我们还做了另一种细胞的7AAD-APC染色，H2O2 200uM 24h处理，没有看到像这个样品组的漂移，活细胞位置跟空细胞的位置差不多，APC染色有一点，很少，没有跟活细胞分得开，如下图1是帖子里我贴的那种样品组，图2是另一种细胞。两种细胞都是肿瘤细胞系。
倪老师，会不会有这种漂移是因为细胞不同吗？还是因为对细胞的处理方式不同造成的？还有您看我们的试剂盒会不会是有问题？

niwanmao

Helen_ztt 发表于 2017-10-22 21:38
哦哦，我明白了！不过，荧光值达到多少才算阳性，而不是非特异呢？还有我们还做了另一种细胞的7AAD-APC染 ...

造成荧光信号漂移的原因很多，但是无论如何漂移，只要你用的AV/PI是质量过关的，都是很好能够分群的。

Helen_ztt

niwanmao 发表于 2017-10-24 13:48
造成荧光信号漂移的原因很多，但是无论如何漂移，只要你用的AV/PI是质量过关的，都是很好能够分群的。 ...

明白了，谢谢倪老师！