14色鼠源肿瘤TILs 染色

skywalker

niwanmao 发表于 2017-11-13 10:02
感谢分享。

有个小疑问，里面的NK标记为什么用CD335，不用CD56？

小鼠的NK，我们一般用CD335来标记。也试过用NK1.1和CD49b标记。

谱一首幸福

skywalker 发表于 2017-11-13 20:27
1.        Digestion solution by Miltenyi degestion machine（no need add DNase）
a.        Prepare Enzyme D by re ...

多谢

niwanmao

skywalker 发表于 2017-11-13 20:28
小鼠的NK，我们一般用CD335来标记。也试过用NK1.1和CD49b标记。

查了下资料明白了，小鼠NK不像人NK表达CD56

鑫鑫点灯灯

请问你的电压和补偿是用实验管一次性调节的，还是做了单染管一个个调节的？如何调节FSC，SSC电压，使细胞呈现在正确的位置？谢谢

谱一首幸福

你这所有的颜色应该不是同时染的吧？流式只有4个通道啊

skywalker

鑫鑫点灯灯 发表于 2017-11-17 00:09
请问你的电压和补偿是用实验管一次性调节的，还是做了单染管一个个调节的？如何调节FSC，SSC电压，使细胞呈 ...

电压一般用测试管来调 用单阳来检验 这样是速度最快的 也可以用单阳管逐个调节 但是浪费时间

skywalker

谱一首幸福 发表于 2017-11-20 09:32
你这所有的颜色应该不是同时染的吧？流式只有4个通道啊

流式现在已经有50个通道的了 笑哭

谱一首幸福

skywalker 发表于 2017-12-1 22:41
流式现在已经有50个通道的了 笑哭

我们实验室的流式比较低端，哎

CART

老师你好，非常感谢你的分享，我有一些疑问期待你的回答。1.从一开始FSC-A和SSC-A界面，圈门的时候为什么左下角高密度的细胞不要呢，这一类细胞是什么细胞呢？2.染CD3时，CD3和SSC-A界面时，你的阳性比例是7.2%。可能是肿瘤来源不同，我做的结果大概为34%，阳性比例差异很大，且图形的形状差异很大，不知道我的结果是否合理。3接着从CD3阳性细胞中染CD8，与同型对照相比，CD8染色分群不明显，且其形状与同型对照类似，只是位置进行了平移，这种情况是否考虑为非特异性染色。流式新手，问题比较粗浅，麻烦老师抽空解决下我的疑问。

niwanmao

CART 发表于 2021-8-31 18:40
老师你好，非常感谢你的分享，我有一些疑问期待你的回答。1.从一开始FSC-A和SSC-A界面，圈门的时候为什么左 ...

这个是4年前的帖子，楼主不一定会及时来回答。
我先来回答一下吧：
1、左下角高密度的那些，究竟是碎片还是淋巴，是可以通过CD3+T反设门确认的，如果不是，就应该排除，否则会导致后续的分析干扰信号过多。每台机器有每台机器的阈值，可能楼主把阈值设的比较低，所以碎片较多。
2、CD3+T细胞的比例，只要是分群明显且特异的，比例多少都是合理的，因为组织的来源、动物模型的不同。
3、CD8一般不应该分不开，那么你前面所说的CD3+T 得考虑非特异性染色了。

总之，讨论问题，其实强烈建议放图上来，而且是能够将相邻通道的散点图放上来，这样可从不同通道之间的信号组合，发现蛛丝马迹。