帮忙看看做的这个凋亡，补偿调不好，FITC单染没有正常细....

小小一铁匠

niwanmao 发表于 2019-9-8 23:02
这不叫电压相差那么大。电压你不应该变动的，准确的说是FITC向右偏了，这很正常。
把补偿调好，就可以设 ...

您是说可以直接调节补偿是么

niwanmao

小小一铁匠 发表于 2019-9-19 17:48
您是说可以直接调节补偿是么

对，象AV/PI这个检测，非常简单，按横平竖直原则。

山楂李话梅

老师，我也遇上了一样的问题，想请教一下
1、为什么Annexin V/PI的双染样本，没必要做单阳性参照就能直接调呢？我用的是Annexin V FITC-PI。的确我自己没有根据单染组，瞎调电压能让它分出很漂亮的三群。
2、我的无凋亡组，也就是正常细胞双染，调节FITC和PI的电压到10^3以内，以此为画十字门，作为阳性阴性的分隔，然后上凋亡组，整体细胞群的偏移很大，那我的十字门是应该以我分群的情况去画是么？就不需要参考无凋亡组画的门了？

niwanmao

山楂李话梅 发表于 2021-5-3 21:17
老师，我也遇上了一样的问题，想请教一下
1、为什么Annexin V/PI的双染样本，没必要做单阳性参照就能直接调 ...

1、因为发生凋亡和坏死的细胞，在染色强度上和阴性细胞群分得非常开。根据业内原则，分群清楚的实验 ，不需要设置对照。
2、整体细胞群偏移，是因为实验组进行了其它处理，所以细胞状态发生了改变，因为本底荧光水平就不一样了，因此，设门不需要参考未处理的细胞。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-4 08:39
1、因为发生凋亡和坏死的细胞，在染色强度上和阴性细胞群分得非常开。根据业内原则，分群清楚的实验 ，不 ...

设门不需要参考未处理的细胞的话，是不是未处理的细胞的双染就没必要测了？只上空白调下电压，上处理的双染组调好补偿后就可以直接收集了？

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-30 21:45
设门不需要参考未处理的细胞的话，是不是未处理的细胞的双染就没必要测了？只上空白调下电压，上处理的双 ...

一切都以经验为基础，只要有经验，可直接上双染样本。因为双染样本里面，各个群体几乎都在（当然死的很多的样本除外）。