细胞内钙离子检测经验分享

dongfangyao

想请教下楼主几个问题：
1.上机的细胞浓度大概是什么范围？上样的体积有多少？
2.加入刺激药物的时候需要控制药物浓度，那么就需要知道管子里还剩多少体积，所以想问测定基线过程中失去的液体怎么计算(因为我们实验室的Fortessa上样的时候，一开始液体会被仪器吸走一部分，再加上20s过程吸走的，不清楚怎么考量这些量)

niwanmao

dongfangyao 发表于 2022-5-24 22:50
想请教下楼主几个问题：
1.上机的细胞浓度大概是什么范围？上样的体积有多少？
2.加入刺激药物的时候需要控 ...

楼主不一定经常在线，我觉得这两个问题都不是问题啊。
细胞浓度和体积，还是参考常规流式来好了，1×10E5~1×10E6/ml均可，由于获取时间上的要求，可将上样体积放大到200~500ul，确保量足够支持5~10分钟的获取。
残留液体的体积，我觉得首先可通过水，进行多次试验，了解你的仪器每次同样的时间，会损失多少量，再进行试验。  其次，也可以用枪头大致了解剩余量。

dongfangyao

niwanmao 发表于 2022-5-25 08:18
楼主不一定经常在线，我觉得这两个问题都不是问题啊。
细胞浓度和体积，还是参考常规流式来好了，1×10E5 ...

谢谢倪老师~  

prettygirl001

Veblen 发表于 2019-12-30 19:02
除了您提到的KCL, ionomycin刺激引起钙硫的效果也不错。

你好 我用的终浓度5μM的ionomycin   上流式10min   细胞没什么反应，我查了下 离子霉素分离子霉素和离子霉素钙盐   我买的离子霉素，化学式里没有Ca2+，是不是刺激时buffer里面要含Ca2+？？？

niwanmao

prettygirl001 发表于 2023-9-15 09:26
你好 我用的终浓度5μM的ionomycin   上流式10min   细胞没什么反应，我查了下 离子霉素分离子霉素和离子 ...

离子霉素只是阳性对照的刺激剂。钙内流指示剂你用了什么？具体步骤如何？

Veblen

prettygirl001 发表于 2023-9-15 09:26
你好 我用的终浓度5μM的ionomycin   上流式10min   细胞没什么反应，我查了下 离子霉素分离子霉素和离子 ...

建议选择Fluo-3/4AM探针检测细胞内钙离子浓度的变化

yap

Ca2+流信号是不是用Flipr仪器监测最好？能检测瞬时的信号，流式的话，我觉得不方便。除非是累积的Ca2+信号。

niwanmao

yap 发表于 2023-9-25 12:49
Ca2+流信号是不是用Flipr仪器监测最好？能检测瞬时的信号，流式的话，我觉得不方便。除非是累积的Ca2+信号 ...

只要能达到目的都行吧。

流式检测钙离子内流，也是检测瞬时的变化的。

prettygirl001

老师您好，我的问题是  刺激前基线不平稳  请问是哪里出问题了呀  也不是每次都这样

prettygirl001

另一个问题是  meanX 数值 怎么换算成 上图中min的横坐标呀  ？③ 如果导出fcs文件  在flowjo中处理 ，如何导出时间相关的数值？