肝脏巨噬细胞

blue_sky2535

niwanmao 发表于 2020-3-11 22:52
对。

嗯嗯，谢谢前辈

wmj123456

请问下，为什么在分离小鼠肝脏巨噬细胞的时候，不用percoll分呢？我查阅的文献里，有用30%或者33%的percoll分离的？求大佬解答。最后做了实验，双染了F4/80-PE和CD11b-FITC，感觉CD11b的阳性比例很低，能否帮忙看一下是哪些原因导致的？

yxyyjs

wmj123456 发表于 2021-12-14 10:28
请问下，为什么在分离小鼠肝脏巨噬细胞的时候，不用percoll分呢？我查阅的文献里，有用30%或者33%的percoll ...

组织里的巨噬细胞不好分，之前用过商品化的组织巨噬细胞分离液，水平离心完了应该有6层，第二层还是第三层是巨噬细胞层忘记了，反正都是很细很隐约很勉强的一层，回收起来跟盲收也差不多了多少。最后就放弃富集巨噬细胞了，直接取组织然后剪碎然后冰浴下直接堆在滤器上研磨，收了所有细胞再过滤、裂红后孵育F4/80-CD11B-CD206-MERTK流式检测，机子条件有限没做PI或坏死，只能说能做出来，但结果不漂亮，跟病理片子的表型基本一致，

wmj123456

yxyyjs 发表于 2021-12-14 11:37
组织里的巨噬细胞不好分，之前用过商品化的组织巨噬细胞分离液，水平离心完了应该有6层，第二层还是第三 ...

谢谢您的回复。您的意思是，我使用的percoll来分离，有可能我富集到的巨噬细胞不是很多，所以导致我的结果里CD11b阳性比例很少？其实感觉F4/80阳性比例也不多。您说的方法是，建议直接消化肝脏组织，然后全部细胞用来染色吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2021-12-14 10:28
请问下，为什么在分离小鼠肝脏巨噬细胞的时候，不用percoll分呢？我查阅的文献里，有用30%或者33%的percoll ...

Ficoll和Percoll大多针对淋巴细胞的特点进行密度梯度离心，实现分离淋巴细胞的目的。巨噬细胞大多在这个范围之外，所以用于分离巨噬细胞，个人不太建议。如果有文献用了这个方法，可与作者探讨一下。

wmj123456

niwanmao 发表于 2021-12-14 15:10
Ficoll和Percoll大多针对淋巴细胞的特点进行密度梯度离心，实现分离活细胞的目的。巨噬细胞大多在这个范 ...

倪老师，是否用percoll富集的问题，我问了师兄，他的意思是如果只是单纯地鉴定巨噬细胞，可以不用富集。您看我的结果，是否可能是由于富集导致的目的细胞的丢失，所以CD11b表达不高？我感觉F4/80是不是也是表达比例不高？其他的还会有哪些原因导致我这个结果的？

niwanmao

wmj123456 发表于 2021-12-14 21:33
倪老师，是否用percoll富集的问题，我问了师兄，他的意思是如果只是单纯地鉴定巨噬细胞，可以不用富集。 ...

我表述不完善，我指的是Ficoll和Percoll分离活的淋巴细胞，最终结果可以说是富集。
巨噬细胞的密度和淋巴细胞密度完全不同，所以用Percoll不适合的。

如果你是经过Percoll处理的话，可能细胞丢了。