为什么我单染Brdu没有细胞分群，而只有一个细胞团块？

范晋波

qyj2017 发表于 2020-5-7 17:28
步骤如图所示，我的变性剂没有放在-20保存，会不会是变性剂失效了呢？但是我之前也做出来过分群的效果， ...

如果你的实验条件没有变的话  我看那一群都是阳性啊

niwanmao

qyj2017 发表于 2020-5-7 17:32
感觉这个分的也不是很开。。

不知道你上面分群不同两个图，细胞所处的状态是否一致？
如果细胞增殖状态不一样，有这样的差异也是可能的，从荧光强度看，可能那个不分群的就全部都是BrdU掺入的增殖比较强的细胞。

下回我觉得你可以同时做一管外周血淋巴细胞作为阴性对照，就可以明确做出来是真阳性还是没分开。但我觉得你好几个都能分出来，条件应该是没问题的。

qyj2017

niwanmao 发表于 2020-5-7 18:01
不知道你上面分群不同两个图，细胞所处的状态是否一致？
如果细胞增殖状态不一样，有这样的差异也是可能 ...

都是Control。。。然而我给药组也分不开。。按理说不可能全染上阳性吧？

qyj2017

范晋波 发表于 2020-5-7 17:35
如果你的实验条件没有变的话  我看那一群都是阳性啊

这个都是control，没有给过药的，但是按理说也不可能全部都是S期细胞吧？我给药组测的也是分不开。。我真的找不到原因

qyj2017

niwanmao 发表于 2020-5-7 18:01
不知道你上面分群不同两个图，细胞所处的状态是否一致？
如果细胞增殖状态不一样，有这样的差异也是可能 ...

会不会是我2%的多聚甲醛失效了 我是去年年末配的 一直放在四度冰箱

niwanmao

qyj2017 发表于 2020-5-7 21:10
会不会是我2%的多聚甲醛失效了 我是去年年末配的 一直放在四度冰箱

多聚甲醛不会这么容易失效，尤其是你保存在低温环境下。
我觉得还是跟细胞本身有关。

tiger

qyj2017 发表于 2020-5-7 21:10
会不会是我2%的多聚甲醛失效了 我是去年年末配的 一直放在四度冰箱

Data001做的双标记，都是BRDU吗？

qyj2017

tiger 发表于 2020-5-8 09:46
Data001做的双标记，都是BRDU吗？

都是只标记了Brdu  没有标记PI

qyj2017

niwanmao 发表于 2020-5-8 08:23
多聚甲醛不会这么容易失效，尤其是你保存在低温环境下。
我觉得还是跟细胞本身有关。 ...

谢谢老师，我再试试吧

tiger

qyj2017 发表于 2020-5-8 13:59
都是只标记了Brdu  没有标记PI

FL1和FL4双阳性才对啊。你把DATA001和DATA002的FCS文件发上来。