什么原因导致非特异性抗体结合，如何避免？

wmj123456

niwanmao 发表于 2020-6-29 10:07
你的意思是，做胞内因子的同型对照时，只加入表面标记，而不加入胞内因子抗体？ 那不叫同型对照，如果是 ...

倪老师好，我有个小鼠CD4单染的数据，共染了5个指标，现在有个疑问是，在CD4和CD45散点图的时候，用红色框出来的那群是非特异性吗？是哪种原因产生的非特异性？但是用CD4和死活散点图看的时候，这群非特异性几乎没有，和CD8散点图也没有，很费解，麻烦分析下数据

niwanmao

wmj123456 发表于 2025-9-1 17:19
倪老师好，我有个小鼠CD4单染的数据，共染了5个指标，现在有个疑问是，在CD4和CD45散点图的时候，用红色 ...

从其它几个通道看，就是非特异性的，这种信号，理论上你其它单染管也应该有才对

wmj123456

niwanmao 发表于 2025-9-1 19:21
从其它几个通道看，就是非特异性的，这种信号，理论上你其它单染管也应该有才对

是的，其他单染管也会有的，这些非特异性的来源是咋样的？是死细胞的非特异性吗?？而且，CD4和死活散点图，这些非特异信号弱一些，对于这个老师咋理解

niwanmao

wmj123456 发表于 2025-9-1 20:45
是的，其他单染管也会有的，这些非特异性的来源是咋样的？是死细胞的非特异性吗?？而且，CD4和死活散点图 ...

这种自发荧光是由于细胞内源性的分子造成的，自发荧光物质在紫外和紫光区域激发的有色氨酸类、吲哚胺类、纤维蛋白原、二聚体、胶原等，蓝光区域激发主要是NADH、脂褐质、吲哚胺类、二聚体、核黄素。

wmj123456

niwanmao 发表于 2025-9-1 20:59
这种自发荧光是由于细胞内源性的分子造成的，自发荧光物质在紫外和紫光区域激发的有色氨酸类、吲哚胺类、 ...

倪老师，这些是在差不多对角线的位置，您如何判断不是死细胞产生的非特异性结合？因为在红光下信号较弱才判断出来的吗

niwanmao

wmj123456 发表于 2025-9-1 21:12
倪老师，这些是在差不多对角线的位置，您如何判断不是死细胞产生的非特异性结合？因为在红光下信号较弱才 ...

死细胞的非特异性染色更强，延伸得更远