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发表于 2022-6-16 20:42:50
来自手机
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我们的公众号热心战友张鼎奇给了我们极其详细的解释：
Miltenyi的REAlease系列确实是最佳解决方案，但是只能搭配Miltenyi自己的REAlease抗体使用，和一般的流式抗体甚至是miltenyi自己的REAfinity都不配套。
如果Realease系列里面没有提问者需要的产品，不应该是把分选后的流式抗体去除掉，而是用一个不与后续作为药物的抗体竞争表位的流式抗体进行分选。假如用于分选的抗体是A克隆，用作药物的抗体是B克隆。可以先用A与PBMC孵育，再用B与PBMC孵育，然后用识别B的荧光二抗染色，如果流式可以检测到AB双阳性细胞，就说明二者不竞争。类似的原理也用于接受PD-1抗体治疗的患者流式监测上，染色的时候要用与penbro非竞争性的PD-1抗体染色。
第二种解决方法就是，即使发现A和B是竞争性的，也未必会影响实验结果，因为分选出的细胞培养一段时间后，被抗体结合的蛋白会被内呑，新的蛋白会取而代之，可能依然会有荧光信号，但是蛋白的功能不会受影响。这一点需要实验验证。
如果非要除去流式抗体，可以用glycine pH=3的buffer和细胞短时间孵育，再加入Tris pH=8.0中和，具体的溶液配方，孵育时间需要使用者自己摸索，没有现成方案。
另外，用biotin除去四聚体的方法，显然不适用于抗体，因为MHC四聚体是用链亲和素和生物素化的pMHC结合，这才能通过添加生物素解聚，一般的抗体和抗原的结合是不会被生物素扰动的。
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楼主: H4nn1
发表于 2022-6-16 11:46:16
