分选后细胞上的抗体怎么去除？

liuruiluna

看看细胞分选有没有负选的可能

叶晶

niwanmao 发表于 2022-6-16 11:16
d-biotin是B族维生素生物素的天然存在的生物活性形式，参与脂质、蛋白质和碳水化合物的代谢。 Knabel 等 ...

倪老师，在美天旎的官网上没有找到您说的realease的试剂盒，您这边有货号吗？

niwanmao

叶晶 发表于 2022-6-16 17:07
倪老师，在美天旎的官网上没有找到您说的realease的试剂盒，您这边有货号吗？ ...

https://www.miltenyibiotec.com/U ... se-support-kit.html

niwanmao

我们的公众号热心战友张鼎奇给了我们极其详细的解释：
Miltenyi的REAlease系列确实是最佳解决方案，但是只能搭配Miltenyi自己的REAlease抗体使用，和一般的流式抗体甚至是miltenyi自己的REAfinity都不配套。
如果Realease系列里面没有提问者需要的产品，不应该是把分选后的流式抗体去除掉，而是用一个不与后续作为药物的抗体竞争表位的流式抗体进行分选。假如用于分选的抗体是A克隆，用作药物的抗体是B克隆。可以先用A与PBMC孵育，再用B与PBMC孵育，然后用识别B的荧光二抗染色，如果流式可以检测到AB双阳性细胞，就说明二者不竞争。类似的原理也用于接受PD-1抗体治疗的患者流式监测上，染色的时候要用与penbro非竞争性的PD-1抗体染色。
第二种解决方法就是，即使发现A和B是竞争性的，也未必会影响实验结果，因为分选出的细胞培养一段时间后，被抗体结合的蛋白会被内呑，新的蛋白会取而代之，可能依然会有荧光信号，但是蛋白的功能不会受影响。这一点需要实验验证。
如果非要除去流式抗体，可以用glycine pH=3的buffer和细胞短时间孵育，再加入Tris pH=8.0中和，具体的溶液配方，孵育时间需要使用者自己摸索，没有现成方案。
另外，用biotin除去四聚体的方法，显然不适用于抗体，因为MHC四聚体是用链亲和素和生物素化的pMHC结合，这才能通过添加生物素解聚，一般的抗体和抗原的结合是不会被生物素扰动的。

niwanmao

流式中文网公众号热心战友imsiyin回复：
天啊，我也纠结过这个问题。之前磁珠分选用到了APC的抗体，但是分选出来的细胞想要染色亚型就不能再用APC通道的抗体，为此这个问题纠结了我很久。当时我们选择把分选出来的细胞冻存后复苏，会好一些

毛豆24821

我们之前也尝试想去除已结合的抗体，酸处理的方法看出来是有用的，不过要摸索条件，而且不确定对细胞的影响多大。