小鼠血液裂红后白细胞分群及单核抗体选择

三三两两小星星

感觉最近取血裂解的操作到最后离心是有沉淀的，白细胞总的成像也比较稳定，总的来说就是裂解液要够，离心我一般是7-8min,第一次裂解离心后不要直接倒去上清（感觉有一两次我就是这样丢失了部分细胞），吸除上清并留一部分液体，再清洗，这样两遍以后基本上就不会剩多少红细胞了。

我自己的实验因为之前多次双标时CD11b的表现不稳定，查看了一下标记物，感觉单核细胞可以只用F4/80选出来，就只单标了F4/80。但是不知道是不是细胞或者单核比例太少的原因（已经是几管小鼠血混在一起了），软件分析的F4/80+占总live比例浮动得比较大。
不知道这样的步骤有没有问题，我一般是先圈live，再圈上面这群（估计是粒细胞和单核细胞混合），再用F4/80带的FITC和FSC选出来，分析阳性细胞占live的比例。

niwanmao

三三两两小星星 发表于 2022-10-31 13:13
感觉最近取血裂解的操作到最后离心是有沉淀的，白细胞总的成像也比较稳定，总的来说就是裂解液要够，离心我 ...

FSC/SSC的门，是否应该圈大一些，把淋巴和比淋巴大的部分都圈进去？
FITC通道的电压是否够？

三三两两小星星

niwanmao 发表于 2022-10-31 14:37
FSC/SSC的门，是否应该圈大一些，把淋巴和比淋巴大的部分都圈进去？
FITC通道的电压是否够？ ...

老师您好，试过圈淋巴和比淋巴大的位置，这样几乎就没有阳性了。FITC的电压是操作流式的老师调的，我下次需要和他说说调大电压吗？

niwanmao

三三两两小星星 发表于 2022-11-2 19:43
老师您好，试过圈淋巴和比淋巴大的位置，这样几乎就没有阳性了。FITC的电压是操作流式的老师调的，我下次 ...

F4/80这样的分群，是不太好的。
如果圈单个核区域没有阳性，更加说明这些信号并非F4/80真阳性。

三三两两小星星

niwanmao 发表于 2022-11-2 20:14
F4/80这样的分群，是不太好的。
如果圈单个核区域没有阳性，更加说明这些信号并非F4/80真阳性。
...

唉是的，目前做出来的分群都不是很明显的细胞群，所以结果也不稳定，最近打算先送查动物血常规或者考虑不固定当天上机看看。

niwanmao

三三两两小星星 发表于 2022-11-5 14:10
唉是的，目前做出来的分群都不是很明显的细胞群，所以结果也不稳定，最近打算先送查动物血常规或者考虑不 ...

你是固定后次日染色？难怪。一般预试验或者摸索条件，还是得老老实实新鲜样本做吧。

三三两两小星星

niwanmao 发表于 2022-11-5 19:41
你是固定后次日染色？难怪。一般预试验或者摸索条件，还是得老老实实新鲜样本做吧。 ...

是的，因为我们要同时取腹腔灌洗液还有其他组织解剖，一整天下来只能固定第二天上机。现在只能考虑分开做

崔娟娟

我们做临床标本时有自制的裂红液，成分是甲酸，通常裂6-8秒后立刻中和，几乎没有裂不了的标本，但需注意，裂红过头容易把单核细胞也变成碎片。

niwanmao

崔娟娟 发表于 2022-11-15 00:34
我们做临床标本时有自制的裂红液，成分是甲酸，通常裂6-8秒后立刻中和，几乎没有裂不了的标本，但需注意， ...

甲酸影响太大，还是建议用温和的氯化铵裂解液。

三三两两小星星

niwanmao 发表于 2022-11-15 20:27
甲酸影响太大，还是建议用温和的氯化铵裂解液。

老师，我想请问一下，我只是想看单核细胞的百分比的话，新鲜样本需要染死活吗？我看到论坛里很多帖子没有特别说明外周血染死活的问题。