血液染色之后应该先裂红还是应该先染7AAD

niwanmao

叶晶 发表于 2022-6-22 13:52
老师，我是按照这个配方来的，然后因为我用的不多，所以整体缩小了10倍配的

...

我们平时用的都是这个，你能否说一下你配制的具体用量，和最后用的时候是怎么用的？我感觉应该是你配制或使用的时候出了问题。

叶晶

倪老师，当时是称取了8.02g氯化铵和0.84g碳酸氢钠和0.037g的EDTA二钠放到100ml的烧杯里，然后加屈臣氏的水90ml，搅拌至溶解，然后用氢氧化钠调PH到7.4，最后加屈臣氏的水到100ml。用之前先用屈臣氏的水稀释10倍，用的时候是100微升离心后的血沉淀加了1.9ml,避光孵育了10min，然后PBS洗了三遍上机检测的

niwanmao

叶晶 发表于 2022-6-29 10:08
倪老师，当时是称取了8.02g氯化铵和0.84g碳酸氢钠和0.037g的EDTA二钠放到100ml的烧杯里，然后加屈臣氏的水9 ...

EDTA二钠的量应该是0.37g。

顺序应该是先染抗体，15分钟后，再加2ml已事先稀释的1×红细胞裂解液作用10分钟，然后离心即可，不要再洗三遍，EDTA的量应该不太会影响细胞，我觉得应该是被你洗丢掉了。

叶晶

niwanmao 发表于 2022-6-29 19:52
EDTA二钠的量应该是0.37g。

顺序应该是先染抗体，15分钟后，再加2ml已事先稀释的1×红细胞裂解液作用10 ...

好的，谢谢倪老师，我再试一下，因为之前用BD的裂解液的时候，裂解之后我们都会洗一下再上机的，那我不洗看看