感觉我自己调的补偿不对，但又不知道怎么改

Climber

13110789723 发表于 2022-4-15 13:56
老师好，调电压是不是用空白组（只有细胞）上机的时候调，还有，调补偿时maker是指选择通道吗还是啥 ...

说到底调补偿就是调电压，目的就是使A荧光漏给B荧光的与B荧光实际阳性群分隔开，使得通道间的影响最小，所谓单染管自然要选择一些表达量较高的抗原但是又不能选全都表达的抗原，因此对于免疫器官来源的细胞 通常选择靶向CD4 CD8的抗体

13110789723

Climber 发表于 2022-4-18 18:43
说到底调补偿就是调电压，目的就是使A荧光漏给B荧光的与B荧光实际阳性群分隔开，使得通道间的影响最小， ...

老师，我好像懂了，但是我应该怎么修改呢？老师，救命啊。。。

niwanmao

13110789723 发表于 2022-4-18 20:06
老师，我好像懂了，但是我应该怎么修改呢？老师，救命啊。。。

需要用加热处理等方法，制备阳性对照，然后再染。

不过，实际上Annexin V和PI之间的补偿是很容易调的，实在上面的步骤搞不定，你就直接做实验管，数据传到这里，我们帮你调：）

Yuck

13110789723 发表于 2022-4-15 13:54
老师好，绿色的峰值不是代表阳性吗？还是我理解错了，我不是很明白。。。 ...

你先上空白管把电压调好，上单染管看一看电压，你这的坐标都跑10的5以上了，我那diva软件顶多也就显示到这。阴性群一般在10的2阳性在10的4.然后收数据，上单染管调补偿。我们现在说的阴阳性指的是你两个峰的相对位置，你的maker阳性峰几乎没有，这样一般调的不准。你是做什么实验的。

13110789723

niwanmao 发表于 2022-4-19 08:41
需要用加热处理等方法，制备阳性对照，然后再染。

不过，实际上Annexin V和PI之间的补偿是很容易调的， ...

好的老师，我们流式上机是别的实验室老师帮忙测完，直接数据给我们，我下次再测的时候注意一下，再做几次

13110789723

Yuck 发表于 2022-4-19 10:57
你先上空白管把电压调好，上单染管看一看电压，你这的坐标都跑10的5以上了，我那diva软件顶多也就显示到 ...

我现在拿的是我师姐的数据，我们这边都是自学，现在就是看药物对细胞的影响，测一下凋亡，周期这些指标。

13110789723

niwanmao 发表于 2022-4-19 08:41
需要用加热处理等方法，制备阳性对照，然后再染。

不过，实际上Annexin V和PI之间的补偿是很容易调的， ...

对了，老师，我还有一个问题，阳性对照组不就是实验组（加药组）吗？ 而且，我的药物还会抑制凋亡

niwanmao

13110789723 发表于 2022-4-19 13:36
对了，老师，我还有一个问题，阳性对照组不就是实验组（加药组）吗？ 而且，我的药物还会抑制凋亡
...

阳性对照，指的是肯定可以出现Annexin V或PI阳性的那组。你提到你的药物抑制凋亡，所以不属于阳性对照。

13110789723

niwanmao 发表于 2022-4-19 13:53
阳性对照，指的是肯定可以出现Annexin V或PI阳性的那组。你提到你的药物抑制凋亡，所以不属于阳性对照。 ...

那我应该怎么设计我的阳性对照组？找个促凋亡的东西处理一下？我现在越来越迷糊了，画十字门是用空白对照组画门，是这样吧，就下面这样：

1）空白对照：诱导凋亡的细胞不加荧光剂，用来调电压；

（2）单染对照：只加PI或AnnexinV（FITC），用来调节补偿；

（3）阳性对照：诱导凋亡的细胞加本次实验的所有荧光试剂，确认试剂、仪器、操作没有问题；

（4）阴性对照：正常细胞加本次实验的所有荧光试剂，确认细胞正常状态，排除假阳性。

niwanmao

13110789723 发表于 2022-4-19 14:19
那我应该怎么设计我的阳性对照组？找个促凋亡的东西处理一下？我现在越来越迷糊了，画十字门是用空白对照 ...

1、空白对照：调电压
2、阳性对照，单染Annexin V：调节PI-FITC的补偿。
3、阳性对照，单染PI：调节 FITC-PI的补偿。
4、各管实验样本。