求助TREG细胞的流式检测方法

niwanmao

蹦蹦跳跳 发表于 2011-7-15 19:51

                               
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没说莫能霉素的浓度啊？ 其他问题的还没回答

莫能霉素应该是阻断剂，怎么用来刺激？
人类细胞刺激方案如下：

IL-17A

PBMC

PMA (30-50ng/mL)/Iono (1ug/mL)

5hr

培养5－6小时不会发生污染的。如果出现了污染，肯定在刺激之前就发生了。污染当然会影响结果，无论检测什么东西，发生了污染，细胞性状就会改变，那么指标当然也就不可信。

niwanmao

具体的protocol见http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... &extra=page%3D1

aninawang

莫能菌素，不同人使用浓度不完全一致，1-10ug/ml都有人用吧。
至于全血和PBMC，你有没有发现这两种类型的标本，刺激后，会有分群不清楚的情况？
一般建议PMA刺激4-5小时，时间太久会造成CD4表达的下降，6h问题应该也不大，一般不会出现污染。
如果污染，对结果影响很大，因为细菌会争夺细胞的营养，细胞会死，另外，会有很多非特异性杂的荧光，细胞圈门较困难。
希望有帮助。

sugarswallow

ebioscience 公司的破膜剂和专用洗涤液
很好用的，可以查一下，

chujindong

回复 aninawang 的帖子

是什么分群不清楚？是CD4标记的细胞群吗？我最近做的发现有些能分清细胞群，有些不能，刺激条件是一样的。

flyingpnmc

APC的激发波长633/635nm，你CD25 APC没染上色，请确认是否将633的激光点亮，还有是否你们的机器是否有633的激光。