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实验和临床检测中，对于阳性和阴性分群明显的标记，不需要对照即可设门，例如检测T细胞的CD4、CD8，而对于那些阳性和阴性分群不清楚的，例如一些活化标记CD25、CD38、CD69和一些细胞因子，则需要设置生物学参照（如未刺激标本）或同型对照、FMO对照。
今天这篇章节，我们就聊聊同型对照一些八卦。
同型对照在流式细胞术发展史上可以说是历史悠久，它的作用主要是排除特定亚型荧光素抗体的非特异性染色背景。在同型对照的选择上，抗体和同型对照的亚型匹配非常重要，如果亚型不匹配，那么结果就会出乎你的意料。例如下图中，三种不同亚型的同型对照，按照推荐用量，结果可见同型对照表达水平相差很大。
不同亚型同型对照
同型对照目前存在以下两方面缺点：
1、每个抗体均会有不同水平的背景染色，这种背景与其结合特异性、抗体浓度、抗体聚集程度、荧光素：抗体比例等因素有关。 所以，要找到一个与抗体背景染色完全匹配的同型对照非常有难度。
2、同型对照无法反映出其它通道渗漏的荧光背景。不过这个缺陷可以通过同型对照加上其它通道的相关抗体来解决（类似于FMO+同型对照）。
所以，挑选同型对照除了要选对物种、亚型，还需要看抗体的结合特异性、浓度等等各种因素，存在很大的随机性。这也是为什么很多FLOWER在实验中总是发现我的同型对照物种和亚型都对的，为什么总是比实验标本还强或者比空白对照还弱等诡异现象。
节选编译自《Flow Cytometry Contr ols, Instrument Setup, and the Deter mination of Positivity》
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发表于 2015-5-7 20:42:21
发表于 2015-5-12 09:35:52
