最近也在做CFSE检测小鼠脾淋巴细胞增殖，请大家帮忙分析

pushiming77 · 发表于 2013-7-5 09:26:51

昨天我用涡旋的方法混匀的试了，后天我才能出结果。好像说的室温，不是37℃。那个视频上也说的是室温。

木石织梦 · 发表于 2013-7-5 17:50:53

wolfrog 发表于 2013-7-2 14:47

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请问您是怎么做活力测定的呢，用台畔蓝染色吗？

是的

wolfrog · 发表于 2013-7-5 20:46:39

pushiming77 发表于 2013-7-5 09:26

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昨天我用涡旋的方法混匀的试了，后天我才能出结果。好像说的室温，不是37℃。那个视频上也说的是室温。 ...

刚染完有没有看一看染色均一性如何？我的invitrogen的试剂盒倒说是37℃，确实也看到有人说室温的，哎，众说纷纭啊……

pushiming77 · 发表于 2013-7-7 14:20:50

wolfrog 发表于 2013-7-5 20:46

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刚染完有没有看一看染色均一性如何？我的invitrogen的试剂盒倒说是37℃，确实也看到有人说室温的，哎，众 ...

今天出结果了，和以前一样的，想死的心都有了

wolfrog · 发表于 2013-7-7 19:18:49

pushiming77 发表于 2013-7-7 14:20

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今天出结果了，和以前一样的，想死的心都有了

今天我的2uM的出了几个峰看到点希望，别灰心，虽然难摸索但肯定能做出来的。大家一起分析分析。

niwanmao · 发表于 2013-7-7 19:44:48

pushiming77 发表于 2013-7-7 14:20

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今天出结果了，和以前一样的，想死的心都有了

别灰心，实验就是如此，有时候条件都一样，但有可能在某个小小的细节上出了问题，结果就出不来了。多来这里和@wolfrog 等站友交流。

pushiming77 · 发表于 2013-7-7 21:17:42

谢谢各位

木石织梦 · 发表于 2013-7-8 16:58:29

pushiming77 发表于 2013-7-7 14:20

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今天出结果了，和以前一样的，想死的心都有了

细胞染均匀很重要，我一般用37度水浴，然后不停摇匀。可以看到细胞洗涤离心后，透明的黄色。

pushiming77 · 发表于 2013-7-21 22:45:50

田丹，我给你几个建议。
1.脾脏细胞10w-30w一个孔（96well）都可以，而且我做出来细胞越多增殖越明显。在显微镜下可以看到明显的细胞堆积。
2.整个实验过程你应该更快一点。1小时40分钟左右完成差不多可以了。一个脾脏就足够了。从脾脏到单一细胞悬液几分钟就可以了（我是将一个脾脏用两镊子夹着柔，一分钟就可以完成，再用1ml的枪吹20-30次过滤就可以了）
3.抗体用得很少，0.25-1.0μg/mL，我多用0.50μg/mL，抗体不是什么问题。用多了，实验成本太高了
4.你也知道染色是关键，我们都到用到涡悬器（见那视频），涡悬太久细胞出现成一堆，吹也吹不开。真不能太久呢，我用1s。染色10min（我的kit上是这样了，还是室温）,每2min小摇动一下，防止细胞沉降，造成染色不匀一（这好像是染色的关键）。
5.终止的时候也要注意快速混匀。

xiaojua · 发表于 2013-7-25 16:59:21

各位前辈，我第一次做这个实验，用的国产碧云天的CFSE，染色前细胞活力很好，但是染色后检测发现活细胞每天都在降低，D1有40%，D2有8%，是不是CFSE的作用呢，碧云天的试剂是CFDASE，没有提供浓度，而且CFDASE进入细胞后代谢为ＣＦＳＥ，浓度难控制吧？实验中加干预组的细胞活力高很多，在D2也有40%。是不是CFSE浓度没有摸好？谢谢

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