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流式细胞术可高效、快速、多参数检测单细胞的各类指标,Beclin-1蛋白是监测自噬的一个重要指标,然而以前一直都是用免疫组化或Western blot等方法检测,流式则很少应用。本文就是研究流式细胞术定量检测Beclin-1的方法学及其优化,并用3-甲基腺嘌呤检测Beclin-1的抑制情况。用免疫组化方法验证,发现两种方法完全一致。
优化情况如下:
- 用2%牛血清白蛋白/PBS阻断非特异性染色;
- Beclin-1一抗(Mouse Anti-Rat Beclin-1 Monoclonal Antibody 0.004ug/ul. Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz. CA, USA),室温孵育30分钟;
- 制备的标本可保存在4℃ 6小时内检测,否则需要用1%多聚甲醛固定保存在4℃,需在3天内检测。
Beclin-1表达情况
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