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[视频] 流式细胞术的样本制备和实验设计

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发表于 2015-4-17 11:11:43 | 显示全部楼层 |阅读模式
『流式中文网』翻译并总结
视频讲座讲解了4个方面的内容:

1. 细胞来源和细胞悬液制备
2. 标本处理
3. 对照的设置以及使信号最大化
4. 如何选择和使用抗体



一、细胞来源和细胞悬液制备

全血标本:
1. 选择抗凝剂时要注意你要检测的抗原是否受抗凝剂中的组分影响?例如一些CD41抗体对EDTA非常敏感。
2. 裂解液的选择,可选择自配的氯化铵裂解液(http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-178-1-1.html)或者商业化含固定成份的裂解液,但是要需要注意个别抗体可能会受裂解液中某种组分影响。大多数裂解液对所有种类的红细胞均有用,但某些病理性疾病标本或禽流感标本中有核红细胞可能很难裂解。
3. 血浆中是否存在干扰性物质。最典型的例子就是标记B细胞表面的免疫球蛋白,由于血浆中的Ig会影响抗体结合,所以需要事先用大体积的缓冲液洗涤至少3次。


PBMC:
全血标本用Ficoll密度梯度离心后提取出来的单个核细胞,包含淋巴细胞、单核细胞,可用于培养或直接分析。
缺点就是可能会丢失其中某些稀有细胞。


细胞株:
尽管细胞可能会处于不同周期,但细胞群比较同质。


从实体组织制备细胞悬液:
典型的标本是淋巴结、脾脏、肝脏等。
利用物理方法或者酶消化法(如胶原酶)制备。但是酶可能会破坏细胞表面抗原表达。
需要注意的是组织中有些细胞可能不能有效解离出来,例如免疫组化方法可发现脾脏中存在许多F4/80+的巨噬细胞,但在流式中很少看到。

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发表于 2015-4-17 15:52:18 | 显示全部楼层
学习了。谢谢分享。
发表于 2015-4-20 09:11:39 | 显示全部楼层
视频为什么一直缓冲不出来?
 楼主| 发表于 2015-4-20 10:29:07 | 显示全部楼层
tianpaopao 发表于 2015-4-20 09:11
视频为什么一直缓冲不出来?

我这边电信网络,2秒就出来了。
发表于 2015-4-30 09:10:13 | 显示全部楼层
您好,倪老师,想请教您一下,甲醇与皂素穿膜两者的区别。还有就是染色体积为什么尽量用小体积?
 楼主| 发表于 2015-4-30 10:50:06 | 显示全部楼层
向前 发表于 2015-4-30 09:10
您好,倪老师,想请教您一下,甲醇与皂素穿膜两者的区别。还有就是染色体积为什么尽量用小体积? ...

甲醇对表面标记影响很大,而皂素则温和。
染色体积尽量小,并非严格要求,小则抗体用量少,节省抗体,你要用大体积也可以关键是抗体的浓度保持一致就行。
发表于 2015-9-17 17:29:30 | 显示全部楼层
为什么我点视频没反应?
发表于 2015-9-21 00:01:19 | 显示全部楼层
老师,视频打不开,不知在其他网站可否看到?或是有其他办法可以看吗?万分感谢!
 楼主| 发表于 2015-9-21 12:25:30 | 显示全部楼层
chainn 发表于 2015-9-21 00:01
老师,视频打不开,不知在其他网站可否看到?或是有其他办法可以看吗?万分感谢! ...

正常的,貌似跟网络有关,请再试试 2015-09-21_122442.png


@chainn  @52127172
发表于 2016-1-25 13:50:33 | 显示全部楼层
谢谢老师分享,学习了。
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