浸润淋巴细胞的流式检测

skywalker · 发表于 2017-11-3 17:17:10

本帖最后由 skywalker 于 2017-11-6 14:20 编辑

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谱一首幸福 · 发表于 2017-11-3 20:45:09

我大概理解了，第一幅的FSC/SSC的图为什么要这样圈门呢？我的细胞与你做出来的分布差别有点大，按照这样画出来，感觉细胞都是双阴性的

niwanmao · 发表于 2017-11-4 08:44:45

谱一首幸福发表于 2017-11-3 20:45
我大概理解了，第一幅的FSC/SSC的图为什么要这样圈门呢？我的细胞与你做出来的分布差别有点大，按照这样画 ...

不建议对肿瘤消化后的组织提取淋巴细胞操作，不太适合，容易丢细胞。
其次，建议如@skywalker 站友所说那样，加一个CD45，把白细胞先圈出来，否则实体组织细胞干扰太大。

谱一首幸福 · 发表于 2017-11-4 08:52:21

niwanmao 发表于 2017-11-4 08:44
不建议对肿瘤消化后的组织提取淋巴细胞操作，不太适合，容易丢细胞。
其次，建议如@skywalker 站友所说 ...

多谢倪老师

skywalker · 发表于 2017-11-4 09:29:23

第一张图去粘连你的R10这个门还是有点大

谱一首幸福 · 发表于 2017-11-4 11:22:40

skywalker 发表于 2017-11-4 09:29
第一张图去粘连你的R10这个门还是有点大

多谢，按照你说的调整，已看出一点分群的趋势

skywalker · 发表于 2017-11-6 14:19:03

谱一首幸福发表于 2017-11-4 11:22
多谢，按照你说的调整，已看出一点分群的趋势

首先你需要去粘连，然后，CD3的圈门还是太大，你要掌握一个概念，肿瘤细胞是比较大的，淋巴细胞的size是比较小的，结构也比较简单，所以，只会在SSC-A 很低的地方，而且比例很低。
你的补偿再调一下，应该可以看到很明显的CD4,CD8的分群，
而CD4+CD8-,CD4-CD8+的比值加起来，应该超过70%，才是比较合理的数据。这个概念也有助于你圈CD3+.

skywalker · 发表于 2017-11-12 11:31:39

谱一首幸福发表于 2017-11-2 21:23
谢谢您的回答，深受启发，但我刚刚接触这些，还有些不是很理解，可以继续帮忙释疑一下吗？
1、这个消化方 ...

肿瘤浸润的免疫细胞的检测，是一定要加入死活染料的。这样你就可以排除死细胞对染色的影响。
用7-aad也可以。但是7-aad是不可以固定的。
CD3的细胞大小比肿瘤细胞要小很多，一般只会出现在SSC-A或FSC-A 比较低的地方，你要注意圈门的大小。这会很大程度上影响到你CD4,CD8的比例。
补偿需要用单阳管做。这点没啥说的，如果你有beads，可以用专门调节补偿的beads来做，但是那个也不准。
四色的补偿是比较好调节的。

miliamlau · 发表于 2017-12-5 01:29:16

细胞活性保持好的话，能在FSC/SSC图上主群的右下发现很小一群单独的细胞，主要是浸润细胞。

谱一首幸福 · 发表于 2017-12-5 08:57:36

miliamlau 发表于 2017-12-5 01:29
细胞活性保持好的话，能在FSC/SSC图上主群的右下发现很小一群单独的细胞，主要是浸润细胞。 ...

恩恩，多谢

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