血液染色之后应该先裂红还是应该先染7AAD

叶晶

老师，如果我要测血液细胞内的标记物，是先表染再裂红再固定破膜，再染胞内吗？如果我还是用这个裂解液的话，我需要额外再固定吗？

叶晶

niwanmao 发表于 2022-4-17 17:09
多聚甲醛不会破膜，但是固定过的细胞，膜的通透性会增高，所以死活染料容易进入。

两个方案：

好的，老师，还有一个问题想请教一下，如果我做血液样本的胞内标记物染色，是按照表染、裂红、固定、破膜、胞内染、活死染这个顺序来吗，这个时候如果选择BD那款裂解液，是不是可以裂红和固定合二为一？

niwanmao

叶晶 发表于 2022-4-17 17:23
好的，老师，还有一个问题想请教一下，如果我做血液样本的胞内标记物染色，是按照表染、裂红、固定、破膜 ...

可能还不行，因为多聚甲醛的浓度可能还不够。

如果做胞内，还是直接用fix&Perm套装，B液直接就能破膜+裂红。

叶晶

niwanmao 发表于 2022-4-17 19:54
可能还不行，因为多聚甲醛的浓度可能还不够。

如果做胞内，还是直接用fix&Perm套装，B液直接就能破膜+裂 ...

好的，谢谢老师

tiger

叶晶 发表于 2022-4-18 10:21
好的，谢谢老师

死活一定用胺染料。染色顺序为表染+死活、裂红、固定、破膜、胞内染。

叶晶

niwanmao 发表于 2022-4-17 17:09
多聚甲醛不会破膜，但是固定过的细胞，膜的通透性会增高，所以死活染料容易进入。

两个方案：

老师您好，我按照站内 帖子的配方配制了氯化铵裂解液，然后取了100微升细胞沉淀染了CD45的抗体，之后加裂解液混匀，室温裂解了10min，离心后加PBS洗了两遍。但是裂解效果和BD的有些差别，1是氯化铵裂解后还是有肉眼可见的红细胞沉淀，2是我上机检测发现氯化铵裂解的样本的淋巴细胞群不见了，我不知道问题出在了哪里，请老师帮我看一下

叶晶

tiger 发表于 2022-4-18 10:45
死活一定用胺染料。染色顺序为表染+死活、裂红、固定、破膜、胞内染。
...

嗯嗯，谢谢，测胞内的话我就选择胺染料

叶晶

倪老师，可以帮我看一下这个裂解液的结果吗?左边两个是自己配的裂解液，右边两个是BD的裂解液

niwanmao

叶晶 发表于 2022-4-21 13:03
老师您好，我按照站内 帖子的配方配制了氯化铵裂解液，然后取了100微升细胞沉淀染了CD45的抗体，之后加裂 ...

我们平时用没遇到这样的情形，配制的粉剂用量，有没有错？

叶晶

niwanmao 发表于 2022-6-22 13:28
我们平时用没遇到这样的情形，配制的粉剂用量，有没有错？

老师，我是按照这个配方来的，然后因为我用的不多，所以整体缩小了10倍配的