Live-dead kit去死细胞，你还在用PI、7AAD吗？

gcz5340

现在看很多文献上，做流式去除死细胞都是用Invitrogen公司的Live-dead kit，以前一直以为就是PI和7AAD的替代品，查了一下发现完全不同，远比PI和7AAD高级：
1、PI和7AAD发射谱很很宽，488laser发射基本上580BP和690BP都被占用了。Live-dead kit系列有多种，分别对应不同的激光器，发射出不同波长的光，而且发射谱很集中（说明书的图中有反应），这样大大减小了多色试验中的配色和调补偿的难度；
2、PI和7AAD的原理是染死细胞的核，Live-dead kit是染细胞表面或膜内侧的游离胺，活细胞弱阳，死细胞强阳。正是由于原理不同，所以对于一些需要固定破膜步骤的试验Live-dead kit一样适用，就算后面细胞都死了该kit还是能反应前面的死活情况，这点是核酸染料所不能替代的。

附上说明书，有使用过的战友欢迎出来谈谈用后感啊。

PDF附件见： Live-dead kit.pdf (281.83 KB, 下载次数: 132)

2012-8-30 23:11 上传

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gwrr12345

niwanmao 发表于 2019-11-18 19:56
主要是固定成份里面基本上离不开多聚甲醛，而多聚甲醛对PI染色有影响。

谢谢，明白了

niwanmao

gwrr12345 发表于 2019-11-17 22:38
谢谢倪老师的回答，这是因为什么原因呢？自己刚入门不是很懂，还请倪老师不吝赐教，谢谢！ ...

主要是固定成份里面基本上离不开多聚甲醛，而多聚甲醛对PI染色有影响。

gwrr12345

niwanmao 发表于 2019-11-17 21:19
最后会发现这两种染料的信号出不来。

谢谢倪老师的回答，这是因为什么原因呢？自己刚入门不是很懂，还请倪老师不吝赐教，谢谢！

niwanmao

gwrr12345 发表于 2019-11-17 16:50
请问下倪老师，如果是先用PI和7AAD先染细胞死活，然后洗涤离心，后面再固定破膜，这样对于细胞死活判断有 ...

最后会发现这两种染料的信号出不来。

gwrr12345

niwanmao 发表于 2013-1-23 17:46
需要新鲜不固定的，否则会导致假阳性

请问下倪老师，如果是先用PI和7AAD先染细胞死活，然后洗涤离心，后面再固定破膜，这样对于细胞死活判断有影响吗，谢谢。

niwanmao

alina1123 发表于 2013-01-23 13:21:41

                               
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想请教下楼主，区分死活用PI和7AAD都必须是在没有固定的细胞，是吗？固定后细胞就是死细胞了吗？7AAD就全是

需要新鲜不固定的，否则会导致假阳性

alina1123

想请教下楼主，区分死活用PI和7AAD都必须是在没有固定的细胞，是吗？固定后细胞就是死细胞了吗？7AAD就全是阳性的，对吗？

niwanmao

gotofcm 发表于 2012-10-16 10:13:13

                               
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呵呵，你都用过哪些呀？没听你说过有啥不好嘛。

主要并不是说它把阳性测成阴性，而是说它相对来说荧光指数偏低，不能减量

niwanmao

gotofcm 发表于 2012-10-16 10:13:13

                               
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呵呵，你都用过哪些呀？没听你说过有啥不好嘛。

时间比较久了，是有一次抗体接不上用，临时拿来应急。哪个抗体我倒是一下子想不起来了。