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在做流式的时候，可以说99％的FLOWER都是拿到抗体就找说明书，找到说明书就开始找用量，然后按照厂家给的用量直接开始做实验或临床检测，实验结果不佳，往往会首先怀疑抗体问题。此步骤可以说是非常正常、非常普遍的一个流程，也就是所谓的习惯成自然。
但是我们有没有考虑到按照说明书标准用量会导致不佳甚至不正确的结果呢？因为大家可能都忽略了说明书上标准用量后面的一句话：『 It is recommended that the reagent be titrated for optimal performance for each application.』
此时很多FLOWER可能会有疑问：
1、既然抗体作为商品出售，就应该制定标准用量，标准用量就应该保证实验结果，为啥还要我们来滴定呢？
因为厂家出厂的时候，可能针对第一批抗体制定了标准用量，但由于每一批抗体纯化、制备的时候浓度不可能保证完全一致，所以商品化的抗体每一批次最佳用量都可以会有所不同，因此抗体滴定确定最佳用量对于保证实验结果很重要。
2、我不滴定，直接用最佳用量真的会做不好结果吗？
还真的会。就拿我这几天的一个抗体HLA-DR BV421来说，前段时间做免疫分型的时候，按照标准用量，阳性结果能出来，但总感觉阳性峰荧光不强，并且阳性和阴性峰分得不开，与以前做4色免疫分型使用的APC荧光相差甚大。
于是不放心，昨天进行了一次滴定，这次滴定做的梯度不多，只设了3个，分别是1/4量（1.3ul）、半量（2.5ul）、全量（5ul），染色完之后计算染色指数『（阳性峰geomean－阴性峰geomean）/2*SD(阴性峰)』，结果如下：
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发表于 2015-8-19 19:56:42
发表于 2017-2-23 21:43:51
