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流式检测新冠抗体怎么做?

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 楼主| 发表于 2022-1-11 16:43:41 | 显示全部楼层 |阅读模式

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截至 2022年1月11日8点,由SARS-CoV-2大流行引起的COVID-19已导致全球超过551万人死亡 (https://www.worldometers.info/coronavirus) 。现已证明,病毒的Spike (S) 糖蛋白通过其受体结合结构域 (RBD) 与人血管紧张素转换酶 2 (ACE2) 结合,是病毒入侵的通路(Walls 等人 2020;Hoffmann 等人 2020)。 自大流行开始以来,学者们开发了一些可靠、灵敏和特异性的免疫吸附测定法,以确认人类对病毒的体液反应(Bajema 等人 2020),从而能够应用在恢复期血浆疗法的开发(Chen 等人 2020),或者用于研究疫苗接种后不同时间点的整体抗体反应(Anand et al. 2021a),从而了解疫苗反应持久性。

Anand 等人在2021年提出了一种新型流式细胞术方法(Anand SP, et al. High-throughput detection of antibodies targeting the SARS-CoV-2 Spike in longitudinal convalescent plasma samples. Transfusion. 2021;61:1377–1382. doi: 10.1111/trf.16318.),就是使用由稳定表达的天然全长 SARS-CoV-2 S 蛋白的293 T 细胞检测血清中的抗体,这种方法规避了使用 RBD 肽进行血清抗体检测的限制。Simard C等人在最新一期的Cytotechnology提出了一个简化和标准化的方案,实现了半定量检测。

简而言之,将待测血浆与「以天然形式表达SARS-COV2 Spike蛋白的293T细胞(293T-SARS-CoV-2细胞系)」混合,存在于血浆中的抗体(如果有的话)就会结合293T-SARS-CoV-2细胞表面结合的S蛋白,然后再用抗人IgM-IgG-IgA的荧光抗体来检测该复合物的存在。 未转染的239T细胞用作阴性对照。

结果也是相当不错,通过比较非 COVID-19 和确诊的 COVID-19 样本,确定了阳性阈值为1.1,以此cut-off值确认了流式细胞术检测的敏感性 (97.7%) 和特异性 (100%)。
2022-01-11_16-42-04.jpg

总体看下来,与现有的新冠抗体检测方法相比,该方法在时间上可能不具备优势,但是特异度和灵敏度上,由于采用了夹心的原理,所以会更有优势。



信源:Simard C, Richard J, Bazin R, Finzi A, Trépanier P. Standardization of a flow cytometry SARS-CoV-2 serologic test [published online ahead of print, 2022 Jan 3]. Cytotechnology. 2022;1-5. doi:10.1007/s10616-021-00511-1
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