眼科新突破！自体干细胞疗法为视网膜疾病患者带来希望之光，流式保驾护航

niwanmao

视网膜色素变性（Retinitis Pigmentosa, RP）是一组以渐进性光感受器细胞退化为特征的遗传性视网膜疾病，其全球发病率约为1/4000。目前针对RP的治疗手段较为匮乏，且现有疗法往往只能带来有限的改善。鉴于RP的遗传多样性，已鉴定出超过100个与该病相关的基因，因此，开发一种不特指特定基因突变的治疗方法显得尤为迫切。

在这一背景下，干细胞疗法作为治疗视网膜退行性病变的一种前景广阔的策略，正在受到广泛关注。特别是，来源于骨髓的CD34+造血干细胞展现出通过旁分泌机制促进组织修复的能力。Park等人的前期临床前研究已经证实，将人源CD34+骨髓干细胞（Bone Marrow Stem Cells, BMSCs）通过玻璃体腔内注射至视网膜变性的啮齿动物模型中，可以观察到干细胞向视网膜的归巢现象，并对视网膜产生保护效果。

基于上述研究成果，在2014年1月至2023年10月期间，加州大学戴维斯分校眼科中心开展了一项I期、开放标签、单臂研究，招募了7名视网膜色素变性（RP）患者。纳入标准如下：

• 双眼RP确诊依据临床表现及扁平的全视网膜电图（ERG）记录；
  

2. 过去至少六个月内出现外周视觉和夜视能力的渐进性衰退；
3. 最佳矫正视力（BCVA）介于20/60至20/400之间，或视野缩小至10度以下。

研究结果，在2024年7月23日被Ophthalmology Science接受，目前为预览格式，未正式发表，但是值得学习。

材料与方法
研究治疗流程包括骨髓采集、CD34+细胞的分离以及随后的玻璃体内注射，所有步骤在同一日内完成。

骨髓采集在局部麻醉下进行，从髂嵴处获取50-100毫升的骨髓样本。骨髓立即运送至GMP认证的实验室进行CD34+细胞的分离。

CD34+细胞的分离过程分为两步：

• Ficoll密度梯度离心：分离单个核细胞成分。
  

2. Miltenyi CliniMACS系统：通过阳性选择法富集CD34+细胞。

细胞质量控制指标包括：

• 细胞总数需大于5000个。
  

- 微生物污染检查呈阴性（革兰氏染色结果）。
- 内毒素含量符合标准（动态内毒素测试）。
- 细胞活力高于70%（台盼蓝染色）。

一部分分离后的细胞用于流式细胞术分析，以评估CD34+细胞的纯度并监测T细胞（CD3+）的比例。

分离的CD34+细胞（0.1毫升）在准备完毕后2小时内，通过玻璃体内注射给药至受试眼。

治疗后，于第1天、第1周、第1个月、第3个月和第6个月进行跟踪检查，包括综合眼科检查、光学相干断层成像（OCT）、视野测试，以及对后续受试者实施的NEI视觉功能问卷调查。


结果

干细胞质量

该研究成功从所有七名参与者中分离出CD34+骨髓干细胞（BMSCs）：

• 细胞产量：平均每眼玻璃体内注射的活CD34+ BMSCs数量为326±66万（范围：160万至705万）。
• 细胞活力：通过台盼蓝染色测定，最终产品的活细胞平均比例为93.4%±1.7%（范围：87.0%至98.0%）。
• CD34+纯度：放行后流式细胞术分析显示，最终产品中CD34+细胞的平均纯度为72.03%±6.56%（范围：46.61%至94.48%）。
• T细胞污染：最终产品中CD3+细胞的平均占比为1.12%±0.30%（范围：0.45%至2.64%），这表明T细胞的比例极为有限。
  

详见下表：


安全性结果

玻璃体内注射自体CD34+ BMSCs整体上耐受性良好：

• 无严重不良事件：在为期六个月的随访期内，没有报告任何严重不良事件。
• 短暂的副作用：一名参与者在注射后18小时出现了短暂的前房细胞增多和轻微的眼内压升高（30mmHg），但这些问题在24小时内自然消退。
• 视力变化：除了一名参与者在第一周和第一个月时出现暂时的三行最佳矫正视力（BCVA）下降，之后在三个月和六个月时有所恢复，其余所有参与者的BCVA在六个月随访时保持稳定或有所改善。
  

疗效迹象

尽管本研究并未设计来评估疗效，但仍观察到了一些积极的信号：

• 视野变化：Goldmann视野定量分析显示，在随访过程中，六名参与者中有五名的敏感区域保持稳定或有所扩大。一名参与者在初期有改善，但在六个月时有所下降。
• 视觉功能问卷：四名参与者在基线和六个月时完成了NEI视觉功能问卷。所有四人均表现出改善，平均增加了5.5分（范围：2至12分）。其中两名参与者的分数提高了4分以上，这一提升被认为具有临床意义。
• OCT影像：所有参与者的中央黄斑厚度保持相对稳定。在水平OCT扫描上，光感受器层的完整性在两个月时，两只眼睛显示轻微改善，五只眼睛保持稳定或略有下降。
• 视网膜电图（ERG）：所有研究眼在基线时都显示出平坦的ERG信号，细胞注射后该信号未发生变化。
  

长期追踪

对于四名参与者，进行了13至52个月的长期追踪：

• 病情进展：四名参与者中有三名的研究眼BCVA恶化，这可能反映了RP的自然病程进展。
• 并发症：一名参与者在研究后的两年内因后房型人工晶体植入物移位，导致研究眼出现快速视力下降。
  

这些长期观察强调了RP的渐进性特征，以及为了维持治疗效果可能需要重复治疗的需求。


这次I期临床研究验证了对视网膜色素变性（RP）患者采用自体CD34+骨髓干细胞（BMSCs）进行玻璃体内注射的可行性和短期内的安全性。研究团队从骨髓抽样中成功分离并鉴定出了高纯度、高存活率的CD34+细胞，为视网膜退行性病变的细胞治疗提供了有力证据。尽管研究设计并非专为评估治疗效果，但观察到的视觉功能与视野测试中的一些积极信号，为疗法的潜在价值增添了信心。

流式细胞术的分析结果，对细胞制品的质量把控至关重要，证实了CD34+细胞的高纯度以及极低的T细胞污染程度。

然而，研究的小样本量、非盲设计以及参差不齐的长期疗效，突显出亟需更大规模的随机对照试验来全面评估这一创新细胞疗法在RP治疗上的安全性和有效性。未来的研究应考虑引入更精细的功能检测指标，并探索多次治疗的可能增益，以期更精确地衡量疗法的长期影响及其在临床实践中的应用潜力。

参考文献：Phase I Study of Intravitreal Injection of Autologous CD34+ Stem Cells from Bone Marrow in Eyes with Vision Loss from Retinitis Pigmentosa (AAO Meeting Paper)00125-8/fulltext)